自配试剂记录.docx

快速、低成本从斑马鱼组织中提取用于PCR的DNA
试剂：50mM NAOH
l/10th 体积的 IMTris-HCL, PH
一管式通用样品DNA抽提试剂盒
组分 SK8401, 100 次
Qlysis-G Reage萄糖
ACD溶液B用于新鲜或者冷冻血液样本
Ammonium Acetate
配置10M溶液1L,溶解770g乙酸铉于800ml水中，用水定容至1L,过滤灭菌。或者配置 100ml溶液，室温溶解77g乙酸铉于70ml水中，加水定容至lOOmlo ， 储存溶液于密封瓶中，4°C或者室温储存。
Dialysis Buffer 6-1
50 mM Tris-Cl (pH )
10mMEDTA()
4°C储存
EDTA
制备 M (pH ) EDTA：加入 二水合乙二铉四乙酸二钠 disodium EDTA*2H2O 于 800ml水中，磁力搅拌器大力搅拌， (约20gNAOH)o分装高压灭菌。
KC1
溶解适量的KC1,高压灭菌20min,室温储存。最好4M该溶液分装至每无菌试管100ul, 每管用一次丢弃。
Mammalian Cell Lysis Buffer
10 mM Tris-Cl (pH )
M EDTA (pH )
% (w/v) SDS
20 |ig/ml DNase-free pancreatic RNase
前三样可以按试剂要求量配好室温储存，RNase在实验使用时在加入要求的量。胰RNase % SDS中活性不高，但是如果加入浓度高，足可以除去RNA。
NaCl
制备5M溶液：溶解292g NaCl于800ml水中，加水定容至1L。分装高压灭菌，室温储存。
PBS
137 mM NaCl
mM KC1
10 mM Na2HPO4
2 mM KH2PO4
(磷酸盐缓冲液)溶解 8g NaCl, , gNa2HPO4, g KH2PO4 于 800ml 蒸馅 水中，用
。加水定容至IL。分装15 psi ( kg/cm 2)高压灭菌20min。 室温储存，如果有需要，PBS可以加入ImMCaCk和OSmMMgC^。
Phenol
平衡至PH>,操作时戴手套，面部防护，穿实验服。
液态酚-2(FC储存，使用时室温溶解，68°C溶解，%。这个 混合料是一种抗氧化剂，对RNase有部分抑制作用，和微量的金属离子螯合剂对调作用。 此外，它的黄颜色能够很轻易的识别出有机相。
对于融化苯酚，加入等体积的缓冲液(通常0,5MTris-Cl [pH ],室温)。磁力搅拌混 合15min。关掉搅拌器，等到两相分离，用枪头的真空玻璃管尽量抽提除去上层。
加入等体积的0. 1 M Tris-Cl (pH ),磁力搅拌混合15min。关掉搅拌器，等到两相分 离，用枪头的真空玻璃管尽量抽提除去上层。重复抽提直至酚相pH >
% M Tris-Cl (pH )