土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法。.doc

土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法。
6
土壤酶活性测定方法
土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）
一、原理
脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅性磷酸酶用乙酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱，37℃下培养24h。然后在培养液加入40ml %硫酸铝溶液并过滤。吸取3ml滤液于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，于分光光度计上660nm处比色。
注意事项:
1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。
2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验试剂纯度和基质自身分解。
3、如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样
四、结果计算
以24h后1g土壤中释放出的酚的质量（mg）表示磷酸酶活性。
磷酸酶活性=（a样品－a无土－a无基质）×V×n／m
式中：a样品为样品吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；
a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；
6
a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；
V为显色液体积；
n为分取倍数；
m表示烘干土重
土壤蔗糖酶活性测定（3,5- 二硝基水杨酸比色法）
一、原理
蔗糖酶与土壤许多因子有相关性，如与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度有关。一般情况下，土壤肥力越高，蔗糖酶活性越高。蔗糖酶酶解所生成的还原糖与 3,5- 二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。
二、试剂
1）8%蔗糖溶液
2）：1/15M磷酸氢二钠（ Na2HPO4·2H2O溶于1L蒸馏水中）（ KH2PO4溶于1L蒸馏水中）。
3）甲苯
4）3,5- 二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）
，溶于20ml 2mol/LNaOH和50ml水中，再加30g酒石酸钾钠，用水稀释定容至100ml（保存期不过7天）。
5）标准葡萄糖溶液：预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。，用蒸馏水溶解后，移至100mL容量瓶中，定容，摇匀。即为5mg还原糖/mg的溶液。冰箱中4℃保存期约一星期，若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
三、操作步骤
（1）标准曲线绘制
分别吸葡萄糖标准溶液0、、、、、，再补加蒸馏水至1mL，加DNS试剂3mL混匀，于沸水浴中准确反应5min（从试管放入重新沸腾时算起），取出立即泠水浴中冷却至室温。将溶液转移至100ml容量瓶中，定容。
6
以空白管调零在波长540nm处比色，以吸光度值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶测定
称取2 g土壤，置于