猪瘟高免血清 抗猪瘟一猪支原体肺炎二联自家高免血清的研制.docx

猪瘟高免血清 抗猪瘟一猪支原体肺炎二联自家高免血清的研制

　　摘要通过给待出栏肥猪多次免疫猪瘟及猪支原体肺炎疫苗，制备抗猪瘟-猪支原体肺炎二联高免血清。采用ELISA及HA/HI法进行特异性抗体的监测，猪瘟抗体OD值在免疫3次后达～猪瘟高免血清 抗猪瘟一猪支原体肺炎二联自家高免血清的研制

　　摘要通过给待出栏肥猪多次免疫猪瘟及猪支原体肺炎疫苗，制备抗猪瘟-猪支原体肺炎二联高免血清。采用ELISA及HA/HI法进行特异性抗体的监测，猪瘟抗体OD值在免疫3次后达～，血凝效价为1∶2048～4096；猪支原体肺炎抗体S/P值在免疫4次后达～。使用疫苗作为免疫原制备高免血清简朴、安全、有效，可用于猪瘟、猪支原体肺炎的防控。
　　核心词猪瘟；猪支原体肺炎；高免血清；研制
　　中图分类号文献标记码A文章编号 1007-57390２-0333-01
　　猪支原体肺炎和猪瘟是广泛存在的猪的2种传染病，目前均以隐性感染、长期带毒、药物诊断效果不明显为核心特性，使得诊断费用增长，饲料转化率减少，生长速度减慢，给养猪业带来较为严重的经济损失[1-4]。该研究选用相应的疫苗作为免疫原对健康商品猪进行多次免疫，成功制备抗猪瘟―猪支原体肺炎二联自家高免血清，现将成果报告如下。
　　1材料和措施
　　实验动物
　　在武汉博牧生物技术有限公司实验猪场挑选70～80 kg健康肥猪6头，实验猪在断奶及8周龄进行过猪瘟常规免疫，在实验开展前必需拟定受试猪不携带口蹄疫、蓝耳、2型圆环病毒、猪瘟、支原体等病原。
　　疫苗及抗体检测试剂盒
　　实验所用50万倍高效价猪瘟活疫苗和猪支原体肺炎灭活疫苗分别为武汉中博生物股份有限公司及美国普泰克国际有限公司产品。猪瘟及猪肺炎支原体ELISA抗体检测试剂盒分别购自武汉科前动物生物制品有限责任公司和美国IDEXX生物科技股份有限公司。
　　免疫程序
　　猪瘟疫苗根据5、20、80 mL剂量免疫3次，2次免疫之间间隔14 d；猪支原体肺炎的免疫在猪瘟免疫后7 d进行，根据5、20、80、200 mL剂量进行4次免疫，间隔14 d。注射措施均为多点肌肉注射。
　　采血及抗体效价检测
　　每次免疫后7 d进行前腔静脉采血并分离血清，分别根据相应ELISA抗体检测试剂盒阐明书操作，在630 nm处检测各孔的吸光值[5-6]。猪瘟抗体效价由吸光值直接鉴定，并且在三免后同步采用血凝克制法测定血凝价进行对比；猪肺炎支原体效价需计算S/P值，S/P≤为阴性，S/P>为阳性，≤S/P≤为可疑，成果可按试剂盒提供的计算措施换算成终点抗体滴度：lg滴度=+。
　　屠宰及收集血清
　　在抗体效价达到规定期进行无菌放血。常规保定待宰猪，通过颈静脉插管收集全血，立即送往实验室进行血清的分离，加入适量硫柳汞及双抗后分装，-20 ℃保存。
　　无菌检查
　　随机抽取制备的血清样品，接种于血液琼脂和含血清的TSA培养基，分别置于一般培养箱和CO2培养箱中37 ℃培养72 h，观测有无细菌生长。
　　安全检查
　　挑选5头14~20日龄健康未免疫仔猪，按 mL/kg・体重肌肉注射，观测7 d，观测仔猪有无异常反映。
　　2成果和分析
　　血清抗体效价检测成果
　　猪瘟抗体水平。实验猪在每次免疫后7 d采血，用ELISA法检测