异柠檬酸测定试剂(盒)及异柠檬酸浓度测定方法 12.docx

异柠檬酸测定试剂(盒)及异柠檬酸浓度测定方法
专利名称：异柠檬酸测定试剂(盒)及异柠檬酸浓度测定方法
技术领域：
本发明涉及一种异柠檬酸测定试剂(盒)，同时本发明还涉及测定异柠檬酸浓度
的方法，属于食品检验测定技术领域。
背景技术原型铁氧还蛋白、3_甲酰乙酸。
试剂2 缓冲液、稳定剂、丙酮酸合成酶、丙二酸_半醛脱氢酶。
试剂3 缓冲液、稳定剂、异柠檬酸脱氢酶。 辅酶、异柠檬酸脱氢酶、丙酮酸合成酶、丙二酸-半醛脱氢酶、乙酰辅酶A、还原型 铁氧还蛋白、3-甲酰乙酸在试剂l、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂(盒)可以是 干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。
无论是单剂、双剂还是三剂，本发明测定异柠檬酸浓度的方法，其辅酶可以是 NADP+、 NAD+或thio- NAD+中的一种。
具体实施例方式下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。
实施例一本实施例的异柠檬酸测定试剂为单试剂，包括三(羧甲基)氨基甲烷_盐酸缓冲液 100mmol/L稳定剂500,1/L辅酶3mmol/L异柠檬酸脱氢酶10000U/L丙酮酸合成酶12000U/L丙二酸_半醛脱氢酶12000U/L乙酰辅酶A7mmol/L还原型铁氧还蛋白12mmol/L3-甲酰乙酸12mmol/L试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂；使用前，加入纯净水，复溶后使用。 在全自动生化分析仪上设定温度37t:，反应时间10分钟，起始吸光度《0. l，测 试主波长340nm，测试副波长405nm，被测异柠檬酸样品与试剂的体积比例为1/25，反应方 向为正反应(上升反应)，延迟时间大约0分钟左右，检测时间5分钟左右。
加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测 主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出异柠檬酸的浓度大小。实施例二本实施例的异柠檬酸测:定试剂为双试剂，包括试剂i三(羧甲基)氨基甲烷_盐酸缓冲液 100mmol/L稳定剂50mmol/L辅酶3mmol/L乙酰辅酶A7mmol/L还原型铁氧还蛋白12mmol/L3-甲酰乙酸12mmol/L试剂2三(羧甲基)氨基甲烷_盐酸缓冲液 100mmol/L稳定剂50mmol/L异柠檬酸脱氢酶10000U/L丙酮酸合成酶12000U/L丙二酸_半醛脱氢酶12000U/L试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体双试剂，可以直接使用
在全自动生化分析仪上设定温度37°C，反应时间10分钟，起始吸光度《0. 1， 测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测异柠檬酸样品与试剂1、试剂2的体积比例为 2/20/5，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约0分钟左右，检测时间5分钟左右。
加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测 主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出异柠檬酸的浓度大小。
实施例三 本实施例的异柠檬酸测定试剂为三试剂，包括
试剂1三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 10Ommol/L
稳定剂 50mmol/L
辅酶 3mmol/L
乙酰辅酶A 7mmol/L
还原型铁氧还蛋白 12mmol/L
3-甲酰乙酸 12mmol/L
试剂2三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100