菌落总数与大肠菌群数测定.ppt

菌落总数与大肠菌群数测定
第一页，共四十二页。
主要内容
菌落总数测定
大肠菌群测定
MPN法原理（拓展内容）
第二页，共四十二页。
菌落总数测定
掌握菌落总数测定方法
实验原理
不同稀释度的样品管）
三步法：初发酵、复发酵
器材与试剂
样品、无菌生理盐水、LST肉汤，BGLB肉汤
1ml吸管、10ml吸管、试管、小倒管
第十一页，共四十二页。
初发酵
器材与试剂
样品、225ml无菌生理盐水、9ml无菌生理盐水、双料LST肉汤，单料LST肉汤，10ml吸管、1ml吸管、吸球
第十二页，共四十二页。
大肠菌群数测定
实验步骤：

第十三页，共四十二页。
第十四页，共四十二页。
第十五页，共四十二页。
吸取样品方法
第十六页，共四十二页。
加注样品
第十七页，共四十二页。
初发酵结果
右边为阳性结果，小倒管内有气体产生。
第十八页，共四十二页。
实验步骤

（1）选取产气试管
（2）接种至10mlBGLB肉汤中
（3）培养：36℃，48h
（4）观察指标：若产气则报告大肠菌群阳性。
第十九页，共四十二页。
大肠菌群数测定
实验步骤

（1）制备伊红美蓝平板：
45 ℃，无菌，倾注，15ml
（2）选产酸产气的发酵管
（3）接种至伊红美蓝平板
分区划线法
（4）培养： 36℃，48h
第二十页，共四十二页。
分离培养
器材与试剂
初发酵结果（4只发酵管）、酒精灯、接种环、伊红美兰平板培养基
第二十一页，共四十二页。
分区划线法
第一区划线
灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环
第三区划线
灭菌接种环
第二十二页，共四十二页。
分区划线法
操作要点

-40°角
-3条线
“面”而不是“弧”在平板上滑动
第二十三页，共四十二页。
大肠菌群数测定
实验步骤
：

（5）菌落特征：
深紫黑色、有金属光泽
紫黑色、无或略有金属光泽
淡紫红色、中心颜色深
（6）革兰染色、镜检：选特征菌落
第二十四页，共四十二页。
革兰染色法
器材与试剂
结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、酸性复红、生理盐水、酒精灯、载玻片、滤纸
第二十五页，共四十二页。
革兰染色法
涂片：接种环，挑取菌落，
生理盐水一滴，涂匀
热固定：通过火焰若干次
初染：结晶紫一滴，1min，水洗
媒染：卢戈碘液一滴，1min，水洗
脱色：95%乙醇，30s或至无色为止
复染：复红一滴，30s
第二十六页，共四十二页。
涂片
第二十七页，共四十二页。
热固定
第二十八页，共四十二页。
初染
第二十九页，共四十二页。
媒染
第三十页，共四十二页。
脱色
第三十一页，共四十二页。
复染
第三十二页，共四十二页。
革兰氏染色阴性
革兰氏染色阳性
革兰染色法
第三十三页，共四十二页。
复发酵
器材与试剂
培养24小时后的伊红美兰平板、酒精灯、接种环、复发酵管
第三十四页，共四十二页。
大肠菌群数测定
实验步骤

（1）选取鉴定为无芽孢G-杆菌的菌落1-3个
（2）接种至10ml乳糖蛋白胨培养液
（3）培养：37℃，24h
（4）观察指标：产酸，产气
第三十五页，共四十二页。
液体接种
第三十六页，共四十二页。
复发酵
复发酵阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产生
第三十七页，共四十二页。
大肠菌群数测定
注意事项：





第三十八页，共四十二页。
MPN法原理
MPN法（Most Probable Number Method）
目的：对某种细菌进行选择性