《细胞化学染色》 (2).ppt

临床血液学和血液学检验第四章 造血检验的基本方法
华中科技大学同济医学院 医学检验系
陈 万 新
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第二节 细胞化学染色
细胞化学（或组织化学）是在细胞形态学的基础上运用无机化学、有机化学或生物化学等技术研究细增高，其它各型粒细胞白血病时减低；白血病伴感染时增高。
⒋真性红细胞增多症、骨髓纤维化、再生障碍性贫血时增高，PNH时常减低。
，如骨肿瘤、消化道肿瘤的肿瘤细胞碱性磷酸酶常为较强阳性反应。
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酸性磷酸酶染色（ACP）
方法一：Gomori硫化铅法
原理：
在酸性条件下（）酸性磷酸酶能将底物（甘油磷酸钠）水解，产生－PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉淀，定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化铵作用，生成棕黑色的硫化铅沉淀。
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试剂：
：40%甲醛溶液（福尔马林）。
2. 工作液配制：
蒸馏水 37ml
6ml
（5%）硝酸铅 1ml
（%）β－甘油磷酸钠 2ml
（临用时现配）：。
：1g甲基绿溶于50ml蒸馏水中。
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染色步骤：
1.      新鲜干燥涂片甲醛蒸气固定5～10min，流水冲洗5min，待干。
2.      入工作液37℃孵育2～3h，流水冲洗数次。
3.      稀硫化铵溶液浸泡2～3min，流水冲洗。
4.      甲基绿溶液复染10min，流水冲洗，干后镜检。
结果判断：
阳性反应呈棕黄色至棕黑色定位于胞浆中。
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注意事项：
1.  固定剂以甲醛蒸气为最佳。
2. 涂片应薄而干燥，否则固定后易脱落。
3. 此法稳定性、重复性好，染色效果最为理想。
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正常分布
1. 巨噬细胞、部分网状细胞呈较强阳性反应。
2. 单核细胞、T淋巴细胞、浆细胞呈中等强度阳性。
3. 粒细胞、巨核细胞、血小板为阴性或弱阳性。
4. 红细胞系统、B淋巴细胞呈阴性反应。
5. 大多数组织的细胞含有酸性磷酸酶，前列腺细胞中此酶活性最强。
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临床意义
1. 单核细胞性白血病、真性组织细胞性淋巴瘤、T细胞白血病及淋巴瘤、毛细胞白血病、浆细胞白血病、浆细胞瘤、多发性骨髓瘤细胞均呈较强阳性反应。
2. 高雪细胞为强阳性；尼曼－匹克细胞为阴性。
3. 某些白血病，成熟中性粒细胞酸性磷酸酶活性增强，可呈弱阳性至中等强度阳性。
4.  用于某些肿瘤细胞的鉴别诊断。
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苏丹黑B染色（SBB）
原理 苏丹黑B是一种脂溶性染料，能将细胞内的脂类显示出来，呈棕黑色颗粒状定位于胞浆中。
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试剂
1. 固定剂 1∶9福尔马林乙醇液，即40％甲醛溶液（福尔马林）10ml加无水乙醇90ml混合即得。
2. 苏丹黑B溶液（ 5g/L ） 70%乙醇中，可用1月。
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染色步骤
1.      涂片用1∶9福尔马林乙醇液固定5s，流水冲洗，待干。
2.      入苏丹黑B溶液37℃孵育1h，流水冲洗，待干或滤纸吸干。
3.      瑞氏染色液复染，流水冲洗，干后镜检。
结果判断 阳性反应呈棕黑色颗粒状定位于胞浆中。
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注意事项
1.  涂片可不固定，直接入苏丹黑B溶液孵育。
2.  苏丹黑B溶液的温度升至37℃后开始计时。
3. 通常苏丹黑B溶液使用1月后， 染色效果会有所减弱；此时加入1g聚乙烯吡咯啉酮K30（吡咯烷酮）于100ml苏丹黑B溶液中，可延长使用时间。
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正常分布：
：粒细胞系统除早期原始粒细胞外，下阶段细胞均为阳性反应。
：部分细胞为弱阳性反应，颗粒细小疏松，弥散分布；部分细胞可呈阴性反应。
。
、浆细胞、红细胞、巨核细胞均为阴性反应。
临床意义 同髓过氧化物酶染色。
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髓过氧化物酶染色（MPO或POX）
方法一 Washurn联苯胺法
原理：当细胞中存在具有活性的髓过氧化物酶时，能分解底物H2O2释放新生态氧，将联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氢化钠形成稳定的蓝色颗粒定位于胞浆中。
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试剂：
1.      联苯胺溶液 88%～95%的乙醇溶液中，加360g/L亚硝基铁氰化钠饱和溶液1ml，