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实验室滤纸酶活的测定.docx


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纤维素酶一般至少由三种以上的酶组成,因此其综合酶活力测定一般用滤纸 酶活来表示。滤纸酶活测定主要依据纤维素酶水解滤纸产生还原糖的数量,因此, 首先要进行绘制葡萄糖标准曲线。
(1)测定葡萄糖含量的标准曲线绘制
制作葡萄糖标准曲线方法见表纤维素酶一般至少由三种以上的酶组成,因此其综合酶活力测定一般用滤纸 酶活来表示。滤纸酶活测定主要依据纤维素酶水解滤纸产生还原糖的数量,因此, 首先要进行绘制葡萄糖标准曲线。
(1)测定葡萄糖含量的标准曲线绘制
制作葡萄糖标准曲线方法见表1:
表1葡萄糖标准曲线
葡萄糖(ml)
去离子水(ml)
DNS(ml)
反应体系中葡萄糖浓度(mg/ml)
0

3
0


3



3



3



3



3

以上6只试管加3 mL DNS煮沸5 min立即冷却, mL超纯水,以0号 试管对作为空白调零,测定其他试管中葡萄糖溶液的od540值。
根据葡萄糖浓度和测得的OD值做葡萄糖浓度一吸光度曲线。
标准曲线:Y = Ax-B
Y 吸光度值。
x ——葡萄糖浓度(g/L)。
(2)纤维素酶酶活的测定
按表2,先对待测酶液进行100倍稀释(将酶进行稀释是为了使测得OD值 ~,提高结果的准确性,不同酶样品此处稀释倍数不同),然后根 据不同处理加入底物和酶液等组分:
表2 TX3发酵液中纤维素酶活的测定
处理方式
纤维滤纸质量
(mg)
酶液
(ml)
缓冲液
(ml)
DNS(ml)
底物空白
0

1
3

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