一种测定杭白芍花粉活力的方法.docx

一种测定杭白芍花粉活力的方法
一种测定杭白芍花粉活力的方法
本发明公开了一种测定杭白芍花粉活力的方法，包括：收集杭白芍的花粉；将所述的花粉置于培养基的表面进行离体培养；离体培养结束后统计花粉萌发率；所述培养基的组成为：蔗糖80～150g知识产权和浙江地域特色的观赏芍药新品种。
【发明内容】
[0009]本发明提供了一种测定杭白芍花粉活力的方法，可以快速、准确地测定杭白芍的花粉活力。
[0010]—种测定杭白苟花粉活力的方法,包括:收集杭白苟的花粉；将所述的花粉置于培养基的表面进行离体培养；离体
培养结束后统计花粉萌发率；
[0011]所述培养基的组成为:鹿糖80?150g/L,硼酸15?30mg/L,琼脂8?10g/L ；
[0012]?。
[0013]花粉的离体萌发法是测定花粉活力的有效方法，结果可重复性高，一般包括如下步骤:收集花粉，将花粉置于培养基上进行离体培养，在显微镜下观察花粉萌发情况，统计花粉萌发率。
[0014]花粉的萌发能力是反映花粉活力的指标之一，因花粉只有萌发并长出花粉管，才能穿过花柱，进入子房，完成受精作用。花粉的萌发能力通常以花粉萌发率来表示，通过统计花粉的萌发率可以测定花粉的活力。
[0015]离体培养的培养基、培养时间是影响测定准确率的主要因素，不同种、品种的植物，其花粉所适宜的培养基的成分往往差异很大，本发明培养基为固体培养基，有利于后续显微镜的观察，且由水、蔗糖、硼酸和琼脂组成。其中，蔗糖为花粉萌发的主要营养物质来源，硼酸则能够促进花粉的萌发和花粉管的持续伸长，而蔗糖和硼酸只有在适宜的浓度范围内，才能够使花粉良好的萌发。优选的，所述蔗糖的浓度为100g/L，所述硼酸的浓度为20g/L。
[0016]其次，本发明针对杭白芍的花粉在培养过程中存在的下陷现象，对离体培养的培养基中的琼脂含量以及培养时间进行控制，来提高花粉活力测定的准确性。所述离体培养的时间优选为3h，培养基中，所述琼脂的浓度优选为8g/L。另外，本发明的离体培养时间还兼顾了花粉萌发的群体效应，如果培养时间较短，则花粉萌发量少，不能够如实反映花粉活力。在本发明的离体培养时间内，杭白芍的花粉萌发率趋于稳定。此外本发明所述的杭白芍产自浙江省金华市磐安县。[0017]所述收集花粉的方法为:采集杭白芍的花药，置于干燥的器皿中干燥24?48小时，直至花粉完全开裂，然后收集花粉，其中，所述的花药最好取自内层花瓣略绽开、花药隐约可见时的杭白芍的花朵。
[0018]离体培养时，可将未凝固的培养基加入到凹形载玻片的球形凹面内，为对焦清晰，提高统计的准确性，应尽可能保持培养基的表面平整，待培养基凝固后，再将花粉接种至培养基的表面即可。
[0019]适宜的培养温度有利于杭白芍花粉快速的萌发，优选的，所述离体培养的温度为23?28 °C，更优选为25 °C。
[0020]在花粉的离体培养过程中，为了防止所述培养基中水分的蒸发影响花粉的萌发，离体培养时，保持环境的相对湿度为80%?85%，优选为80%。
[0021]花粉离体培养一段时间后，将负载花粉的载玻片置于显微镜下观察，以花粉管长度达到花粉粒直径的I倍及以上的花粉视为萌发，统计萌发率。所述的显微镜具体可采用Olympus BH-2荧光显微镜，更有利于统计杭白芍花粉的