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试剂盒方法提取基因组DNA组和质粒DNA
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实验一 试剂盒方法提取基因组DNA和质粒DNA
黄华如
（生命科学学院，生技091，29号）
摘要：实验用试剂盒方上步操作一次，以洗脱得到更多的DNA；
直接取用5~10ul电泳检测DNA，其余放冰箱待用。
柱式试剂盒方法提取质粒DNA步骤
先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A最好在4℃保存。
从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃振荡培养12-16小时（摇床转速200-300）。注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使浓度过高，超过纯化系统处理能力二降低DNA质量。另外，延长培养时间有利于提高质量DNA浓度，但是菌液培养过长时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
-4mL过夜培养饱和菌液，室温12，000rpm离心1分钟，弃上清，在短暂离心，吸弃残留液体。
加入250uL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬（此步在冰上操作效果更佳）。注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用悬锅振荡器帮助混匀或使用Tip吸头吹打沉淀至完全混匀。
加入250mL溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过4-5分钟。注意：次步处理不能超过5分钟，否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈震荡，否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率。
加入350mL冰上预冷的溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟。
最高速（12,000rpm以上）4℃离心5分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀漂浮的现象。
静置2分钟以上让质粒DNA与吸附柱充分结合，此步十分重要。
室温12，000rpm离心1分钟，弃管中的废液。
加入500mL的通用洗柱液，室温12，000rpm离心1分钟，弃管中的废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否者乙醇会挥发。
重复上步1次。
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室温12，000rpm离心1分钟，甩干残留液。此步不能省略，否者残留乙醇会影响DNA的后续使用（如DNA上样时不能沉淀到加样孔中）。
，加入30-100uL65-80℃，室温放置2分钟。，但产量稍微有所降低。
室温12，000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
由于天泽基因的吸附柱结合DNA能力较强，，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当第一次洗脱的20-30％），。
2 结果分析