发
酵
工
程
翟朔
生物技术122
125242401
桑天牛幼虫高致病性白僵菌菌株筛选
试验材料:
选取枯落层以下20cm内的土壤1kg,。
黄粉虫的老熟幼虫
野外捕捉桑天牛成虫利用1一2a生幼嫩桑枝进行室内饲养,产卵后10d左右,剖取己孵化的桑天牛幼虫,人工接种到毛白杨枝条中,以见蛀屑和虫粪排出确认成活,20d后用于致病性测定。
分离纯化用培养基为PDA培养基。
试验方法:
在灭菌的12cm培养皿中装入供试土样,每皿埋入7头黄粉虫,共3皿。
置于24一27℃下保湿1周后,捡出死虫。
其表面用70%酒精消毒Zmin,无菌水冲洗3次后放入加灭菌滤纸的培养皿内,滴加几滴无菌水,25℃条件下保湿培养。
将虫尸表面形成的分生抱子,利用单抱子分离技术进行菌株的分离纯化,根据菌落形态、分生抱子的大小、形态及分生抱子梗等特征进行鉴定,标记鉴定出的白僵菌菌株。
分离得到的白僵菌经纯化培养,待完全产抱后,刮下分生抱子,%吐温一80无菌水润湿,磁力搅拌器搅拌均匀,经血球计数板计数后,',的分生抱子悬浮液。
同龄桑天牛幼虫浸入抱子悬浮液中30s后,接入毛白杨枝条中,%吐温80一无菌水处理作对照。逐日定时观察记载幼虫死亡情况。虫尸保湿培养,并每天检查,虫体表面长出白色菌丝或分生抱子时用显微镜检查以确定是否为白僵菌感染致死。统计死亡率、感染率,计算出LT50。,筛选出对桑天牛幼虫有较高致病力的菌株。
所用菌株为生物测定筛选出的高毒力菌株BbOO,%吐温一80溶液将其配成5种浓度的抱子悬液,分别为:x105、x106、
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