一种快速检测虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条及其制备方法.docx

一种快速检测虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条及其制备方法
一种快速检测虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条及其制备方法
本发明涉及一种快速检测虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，该试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维膜、吸收垫、PVC板组成I: 16384和1: 65536，用Protein A亲和层析柱纯化多克隆抗体，用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定抗体浓度并调整为2mg/mL ；
[0014] 6cm的长条即为虾蟹螺原体
胶体金免疫层析检测试纸条，包装备用。
[0015]用上述虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条检测的方法，包括:如图2所示，若将含有虾蟹螺原体检测样品加入随机抽取组装的试纸条中，虾蟹螺原体与金标抗体结合并在层析作用下与T线抗体结合，室温下作用15min，阳性结果出现两条红线，即检测线T线和质控线C线，T线显示该样品中含有虾蟹螺原体；若检测样品中不含有虾蟹螺原体，阴性结果只在质控线C线出现一条红线，显示该样品中没有虾蟹螺原体。
[0016]本发明的积极效果在于:
[0017](I)检测速度快:全过程15min内完成，现场即可出结果；
[0018](2)高质量:本方法制备而成的试纸条特异性好、灵敏度高、重复性好；
[0019](3)操作简单:本方法制备而成的试纸条以胶体金作为指示标记，快速定性，结果准确、快速，操作简便，只需要加样检测与结果记录；
[0020](4)易于推广使用:操作人员无需专业培训，按说明书即可完成操作；
[0021](5)成本低廉、运输方便、有效期长；
[0022](6)安全稳定，胶体金无毒性，不造成环境污染。
【专利附图】
【附图说明】
[0023]图1为本发明虾蟹螺原体胶体金免疫层析检测试纸条的组装结构图。
[0024]图2为本发明虾蟹螺原体胶体金免疫层析检测试纸条的原理模拟图及结果判定图。
[0025]其中:1是样品垫；2是结合垫；T是检测线显色位置；C是质控线显色位置；3是硝酸纤维素膜；4是吸收垫；5是PVC板。【具体实施方式】
[0026]本发明采用的具体技术路线的步骤:
[0027]一、抗原的制备
[0028]将分离、培养获得的虾蟹螺原体病原CCTCC M207170，%甲醛12_15小时灭活。灭活病原以12000r/min离心50分钟，洗涤，离心，重复3次，制备成抗原，用紫外分光光度计测定浓度，置于4°C冰箱保存备用。
[0029]二、多克隆抗体制备、纯化和测定
[0030]1、多克隆抗体制备
[0031](I)将500 μ I抗原蛋白溶液溶入500 μ I弗氏完全佐剂中，用Iml注射器在新西兰大耳兔腹部皮下多点注射(第一次免疫);
[0032]( 2 )第一次免疫一周后，免疫抗原与弗氏不完全佐剂等比混匀，采用腹腔皮下多点注射方式(第二次免疫);
[0033]( 3 )第二次免疫一周后，免疫抗原与弗氏不完全佐剂等比混匀，采用腹腔皮下多点注射方式(第三次免疫);
[0034](4)第三次免疫一周后，免疫抗原直接耳静脉注射，一周后,采用心脏采血,分离血清，-70°C保存，得到虾蟹螺原体多克隆抗体。
[0035]2、多克隆抗体纯化和测定
[0036]运用Protein A亲和层析柱对制备的虾蟹螺原体多克隆