血清免疫球蛋白igg提取.ppt

实验一 血清免疫球蛋白IgG的提取
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目的
掌握血清免疫球蛋白IgG提取原理；
熟悉血清免疫球蛋白IgG提取操作过程和方法
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原 理
IgG是血清中主要的免疫球蛋白，占全部抗体含量的70％－实验一 血清免疫球蛋白IgG的提取
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目的
掌握血清免疫球蛋白IgG提取原理；
熟悉血清免疫球蛋白IgG提取操作过程和方法
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原 理
IgG是血清中主要的免疫球蛋白，占全部抗体含量的70％－75％，在临床免疫学检验技术中常用到的第二抗体就是通过用纯化人IgG作抗原免疫动物而来
分离纯化IgG的技术有多种，通常采用综合技术，其中盐析沉淀法常用于IgG的粗制品的提取
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原理
蛋白质颗粒在水溶液中 亲水胶体
蛋白质颗粒在盐溶液中 既不含水膜又不带电荷的不稳定颗粒
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蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，血清免疫球蛋白主要为γ－球蛋白，它在一定浓度中性盐溶液中易于沉淀，而其他蛋白质组分在此时不易沉淀，通过离心可将两者分离。
原理
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材料
样本 正常人血清
试剂
生理盐水、饱和硫酸铵溶液、
透析缓冲液
主要器材 离心机 冰箱 透析袋 紫外分光光度计等
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操作步骤
＋

弃去上清液（含清蛋白）
沉淀溶于生理盐水,

弃去上清液（α、β球蛋白）
沉淀（γ球蛋白及少量β球蛋白）
上清液（β球蛋白）
沉淀为γ球蛋白
室温静置30min,
离心4000rpm,10min
重复一遍
紫外分光光的计测定蛋白含量
沉淀放入透析袋，
充分透析，去除NH4+
室温静置30min,
离心4000rpm,10min
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注意事项
蛋白质的浓度、盐的浓度、PH值、温度对盐析的效果有影响
饱和硫酸铵溶液的滴加方式
盐析后放置时间、离心操作的速度、时间
透析袋的使用
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方法评价
硫酸铵水中溶解度高，受温度影响小，不易使蛋白质变性，操作简单，为盐析中常用的中性盐
硫酸铵中含有氮，会干扰蛋白质的测定，且溶液的缓冲能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要获得纯化的免疫球蛋白，必须经过凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析进一步提纯
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结果判断
效价可用免疫双扩散试验判断
特异性则可通过双扩、免疫电泳或交叉凝集试验进行考察
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思考题
盐析法提取免疫球蛋白的实验原理？
盐析法提取免疫球蛋白时，主要的影响因素有哪些？
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