水朝阳草薄层色谱鉴别方法的建立.doc

水朝阳草薄层色谱鉴别方法的建立
【摘 要】 目的:建立水朝阳草的薄层色谱鉴别方法。方法:取本品粉末2g,加石油醚(30~60℃)40 mL,超声处理20 min,弃去石油醚,药渣挥干,加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯50 mL,超声水内,花朝阳”,故名水朝阳草。菊科旋覆花属植物中绿原酸有较广泛的抑菌作用,3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等诸多药理作用。近年来发现许多有机酸具有多方面的生理活性,如绿原酸、异绿原酸具有很强的抗菌作用[2]。为有效控制水朝阳草药材质量,本文以绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸为对照,采用薄层色谱法鉴别,操作简便、结果直观。
1 仪器与材料
仪器 KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ,梅特勒XPE56电子天平。
材料 绿原酸(批号:110753-200413)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(批号:111782-201204)中国食品药品检定研究院。水为纯化水,其他试剂为分析纯。水朝阳草样品分别采集自贵州龙里、开阳、清镇 (见表1),且所有样品均经贵阳中医学院何顺志教授鉴定。
2 方法与结果
提取方法的考察 称取S1样品2 g 3份,分别按下述方法处理后作为供试品溶液:①加甲醇50 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液。②加石油醚(30~60 ℃)20 mL,弃去石油醚,药渣挥干,加乙酸乙酯50 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液。③加石油醚(30~60 ℃)40 mL,超声处理20 min,弃去石油醚,药渣挥干,加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯50 mL,超声处理40 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液。 取上述供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL,点于同一聚酰胺薄膜上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。结果:方法①主斑点不清晰; 方法②主斑点不清晰; 方法③主斑点清晰,薄层色谱图展距适中,故选择方法③为供试品溶液的制备方法。
展开剂的考察 取S1样品按提取方法③制成供试品溶液,取供试品溶液10 uL、对照品溶液各5 μL点于聚酰胺薄膜上,分别在下述展开系统中展开:①甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶)。②冰醋酸。③甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上层溶液。展开后,取出晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。结果:系统①分离效果差,对照品斑点未显出; 系统②对照品3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸斑点清晰,但与绿原酸对照品对应斑点未分开,未达到理想的分离效果; 系统③两个主斑点清晰,分离效果好。因此选择③为水朝阳草薄层色谱鉴别的展开剂。
耐用性考察
温度的考察 进行低温 (7℃) 、室温(20℃) 、高温(40℃) 的考察。结果表明在上述条件下都能较好分离,斑点清晰,未有明显差异。
湿度的考察进行低湿度(28%) 、中等湿度(58%) 和高湿度(88%)的考察。结果表明在上述条件下都能较