氯化两面针碱体外肾毒性探讨论文.docx

氯化两面针碱体外肾毒性探讨论文
【摘要】目的观察氯化两面针碱在体外对人胚肾细胞293的毒性作用。方法采用MTT法检测不同浓度氯化两面针碱对人胚肾细胞293的毒性。结果氯化两面针碱在体外对人胚肾细胞293有一定的毒性作用。结论氯化两面针碱可临用前加10ml热灭活(56℃，30min)胎牛血清。
，用无血清培养液依次稀释，，，，，，置于4℃冰箱中保存备用。
，置于37℃，饱和湿度，5%CO2的培养箱中，定期观察更换培养液。细胞铺满培养瓶底部时传代，用PBS冲洗两次，%胰蛋白酶2ml消化液，置37℃约1min，倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞间连接消失，表明此时细胞消化适度，吸取上清液，加入完全培养液2ml，反复吹打，将细胞吹打均匀，调整培养瓶中细胞浓度至1×105/ml,加入完全培养液，置于CO2的培养箱。实验中所用细胞均处于对数生长期，活细胞数大于95%。
(MTT法)取对数生长期的人正常胚肾细胞293用胰酶消化后，用DMEM培养液吹打制成细胞悬液加入96孔培养板，每孔190μl，在5%CO2、37℃培养箱培养24h待细胞完全贴壁后，受试孔加入系列浓度受试药物10μl每药3孔，%DMSO的无血清培养基10μl，空白对照孔加入等量的含药无血清培养基而无细胞，各孔加培养基至200μl，培养箱孵育24，48，72h，加入5mg/ml的MTT10μl，继续在培养箱培养4h，取出96孔板顷去上清液，加入DMSO每孔150μl，在摇床上振动摇匀10min，在酶标仪570nm和630nm的波长下测得各孔OD值。按下式计算药物对293细胞的抑制率。
抑制率(%)=对照组OD值-实验组OD值对照组OD值×100%
实验重复3次，计算平均抑制率。
，MDA，LDH的测定(紫外分光光度法)取对数生长期的人正常胚肾细胞293用胰酶消化后，用DMEM培养液吹打制成细胞悬液加入6孔培养板，，在5%CO2，37℃培养箱培养24h待细胞完全贴壁后，，另设空白对照组。在药物作用的12，24，48h后，取培养液的上清液按SOD，MDA，LDH试剂盒中所述方法进行SOD，MDA，LDH的测定。
±s表示，组间的均数采用方差分析进行两两比较，。采用Bliss法计算IC50值。
3结果
，～，吸收度A值随药物浓度的增加逐渐减小，说明氯化两面针碱对人正常胚肾细胞293有一定的毒性作用，且随氯化两面针碱浓度的增大对细胞的毒性增加。结果见表1。表1MTT法测定氯化两面针碱对293细胞株的毒性作用
，MDA，LDH的测定结果结果见表2。表2紫外分光光度法测定氯化两面针碱对人胚肾细胞293毒性作用