367-第十七章 基因重组与基因工程 （genetic recombination and genetic.ppt

第十七章基因重组与基因工程 (ic bination and ic engineering)
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基因重组
是指在体外用酶学方法将不同来源的DNA进行切割、连接,组成一个新的DNA分子的过程,又称DNA重组。
基因克隆
将重组DNA分子导入到合适的受体细胞中,使其扩增和繁殖,以获得大量的同一DNA分子,称此为基因克隆、DNA克隆或分子克隆。
基因工程
实现基因克隆所采用的方法和相关工作,统称为重组DNA技术或基因工程。
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本章主要内容
重要的工具酶
基因克隆常用的载体
重组DNA基本原理
重组技术在医学和制药
工业中的应用
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第一节重要的工具酶
工具酶
基因工程中的工具酶主要是指用于DNA和RNA分子的切割、连接、聚合、修饰、反转录等有关的各种酶系统。
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一、限制性核酸内切酶(RE)
是一类由细菌产生的能专一识别双链DNA中的特定碱基序列、并水解该点磷酸二酯键的核酸内切酶,简称限制酶或切割酶。
根据限制酶的作用特性,一般分为三类:
——Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型,
其中常用的是Ⅱ型限制酶。
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限制酶(Ⅱ型)识别及切割位点
特异识别及切割48个bp长度且具有回文序列的DNA片断,主要产生3种缺口: 5ˊ-粘性末端
3ˊ-粘性末端
平端或钝端
回文序列
是指该部位的核苷酸序列呈180O旋转对称;
粘性末端
是指经内切酶特异切割后产生的5ˊ-末端突出或3ˊ-末端突出的碱基序列相互具有互补性。
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⑴产生5'-粘性末端
⑵产生3'-粘性末端
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⑶产生平(头末)端/钝端
其它特殊性质
的Ⅱ型限制酶
同裂酶(异源同工酶)
同尾酶
可变酶
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同裂酶
又称异源同工酶。指来源不同,但具有相同的识别序列。
在切割DNA时,其切割点可以是相同的,产生平头末端,称为同识同切;
切割点也可以是不同的,产生3ˊ或5ˊ粘性末端,称为同识异切。
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同裂酶——同识同切
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