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雌激素对奶牛乳腺组织细胞凋亡及HSP70蛋白表达的影响
小组成员:赵杰

姜锋
导师:王教授
先培养乳腺细胞,再用不同剂量雌激素和孕激素对培养细胞进行处理,应用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定、透射电镜、免疫组化等技术,检测雌激素对奶牛乳腺组织细胞活性、凋亡和HSP70蛋白表达的影响,实验成果可进一步指导实际的生产工作。
一、主要内容
二、研究意义
哺乳动物乳腺退化主要是通过细胞凋亡途径减少乳腺细胞数量,因此,阐明退化期乳腺凋亡的调节机制对乳用动物生产力的提高及人类乳腺癌的治疗意义重大。乳腺内乳汁积滞是诱导退化期乳腺凋亡的主要原因,退化期的乳腺凋亡受孕激素和雌激素的影响成为研究退化期乳腺凋亡的焦点。
三、研究目标
组织培养及处理;
组织细胞活力测定;
DNA完整性检测;
细胞形态及超微结构观察;
HSP70的表达;
数据统计。
四、技术路线
技术路线
采集奶牛乳腺细胞——进行培养——孕激素和雌激素处理——组织细胞活力的鉴定——LHD活性测定——DNA完整性测定——细胞形态及超微结构观察——HSP70的表达————统计数据
五、可行性分析
(1)工作经验:指导教师是研究方向为动物生殖调控和养牛学的博士,从事动物生殖调控和养牛学的研究内核教学。对本实验的原理和操作比较了解。一直从事此方向的科学研究工作,对动物生殖调控和养牛学有比较全面的认识,积累了比较丰富的理论知识和实际经验。
(2)技术力量:本实验室为农业部重点开放实验室,申请人所在学科是国家重点学科,实验设备齐全。本课题涉及的试验手段和技术均为本实验室的常规技术。多年来,本实验室致力于我国优良动物种质资源的生理生化、营养生理生化、功能基因表达调控、分子遗传标记、环境-基因表达间的互作的研究,覆盖了本项目涉及的各个方面。
(1)- 完成样品采集工作
(2)- 完成细胞培养及各种指标的测定
(3)- Caspase一3活性分析,并整理数据,完成结题工作
六、项目研究计划和预期进展
七、预期研究成果
全面指导SRT研究小组成员的科研思维能力、生物学实验方法、学术论文、实验操作能力等,发表中文核心期刊论文1篇。通过实验对雌激素和孕激素处理后的奶牛乳腺细胞的观察,了解雌激素和孕激素对奶牛乳腺细胞生长以及HSP70蛋白的表达的影响,并通过实验锻炼技能,积累经验,为以后的各类科学研究打下基础.
八、具备的条件和面临的困难
本实验室为农业部重点开放实验室,申请人所在学科是国家重点学科,实验设备齐全。本课题涉及的试验手段和技术均为本实验室的常规技术。多年来,本实验室致力于我国优良动物种质资源的生理生化、营养生理生化、功能基因表达调控、分子遗传标记、环境-基因表达间的互作的研究,覆盖了本项目涉及的各个方面。但操作者实验经验相对不足,我们将会积极查阅文献资料,及时与导师沟通,力争出色完成实验。
九、经费预算
支出科目
金额
(元)
计算根据及理由
实验试剂 1500 需采集大量试剂
仪器使用 1500 仪器的使用和维护用
检测 700
交通补助 30 采购试剂及去校外检测所需费用
其他 1000 实验过程中的其他支出