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北京雷根生物技术有限公司

RIPA 裂解液（强）
产品简介：
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白， 例如去离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三) 组织样本
1、 取 Leagene Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后，使用前取适当量的裂解液
加入 PMSF，使其最终浓度为 1mM。
2、 把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
3、 取液在 氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控
制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
4、 按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或
4℃裂解 15-30min。
5、 步骤 3、4 亦可以采用如下过程：按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加
入含有 PMSF 的 EnhancedRIPA Lysis Buffer。 用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至
充分裂解，过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
6、 10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
7、 进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项：
1、 在壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，
可以不用清洗。
2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量， 如果需要高浓度的蛋白样品， 可以适当减
少裂解液的用量。
3、 培养细胞的裂解在 中，如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/离心管，然后再
裂解。大团的细胞较难裂解充分， 而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对
比较容易裂解充分。北京雷根生物技术有限公司
4、 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex
使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，
不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5、 溶解 Leagene RIPA Lysis Buffer的时候，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效
成分失效。
6、 Leagene RIPA Lysis Buffer的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物， 属正常现象。
该透明胶状物为含有基因组