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0蛋白质的结构
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基本要求：
a、样品必需纯（>97%以上）；
b、知道蛋白质的分子量；
c、知道蛋白质由几个亚基组成；
（1）测定蛋白质一级结构的原则
介
，可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。
蛋白质一级结构的测定
多肽链断裂法：酶解法和化学法
酶解法:
胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，羧肽酶和氨肽酶
多肽链的选择性降解
Trypsinase ：R1=Lys和Arg侧链（专一性较强，水解速度快）。R2=Pro 水解受抑。
肽链
水解位点
胰蛋白酶
-HN-CH-CO-NH-CH-CO-
R1
R2
或胰凝乳蛋白酶（Chymotrypsin）：R1=Phe, Trp,Tyr时水解快; R1= Leu，Met和His水解稍慢。
R2=Pro 水解受抑。
肽链
水解位点
糜蛋白酶
Pepsin：R1＝Phe, Trp, Tyr; Leu以及其它疏水性氨基酸水解速度较快。
R2=Pro 水解受抑。
肽链
水解位点
胃蛋白酶
thermolysin：R2=Leu、Ile、Phe、Tyr、Val、Trp、Met 等疏水性强的氨基酸水解速度较快。
R2=Pro或Gly 水解受抑。
R1或R3=Pro 水解受抑。
肽链
水解位点
嗜热菌蛋白酶
谷氨酸蛋白酶： R1=Glu、Asp(磷酸缓冲液); R1=Glu (磷酸缓冲液或醋酸缓冲液)
精氨酸蛋白酶： R1=Arg
肽链
水解位点
谷氨酸蛋白酶和精氨酸蛋白酶
化学法：可获得较大的肽段
溴化氰(Cyanogen bromide)水解法，它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。
多肽链的选择性降解
化学法：可获得较大的肽段
羟胺（NH2OH）：专一性断裂-Asn-Gly-之间的肽键。也能部分裂解-Asn-Leu-之间的肽键以及-Asn-Ala-之间的肽键。
多肽链的选择性降解
胃蛋白酶：R1= Phe、Trp、Tyr或其它氨基酸
嗜热菌蛋白酶：R2=Leu、Ile、Phe、Tyr、 Val、Trp、Met 等
溴化氰法:R1= Met (化学方法)
胰蛋白酶（胰梅）：R1= Lye&Arg
糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）：R1= Phe、
Trp&Tyr
小结
（2）常用测定方法简介
。
蛋白质一级结构的测定
Edman （苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行解离。
Edman氨基酸顺序分析法
测定每条多肽链的氨基酸组成
蛋白质一级结构的测定
（2）常用测定方法简介
。
利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。
蛋白质一级结构的测定
示例(十肽的水解)
A法水解得到四个小肽：
A1 Ala-Phe
A2 Gly-Lys-Asn-Tyr
A3 Arg-Tyr
A4 His-Val
B法水解得到四个小肽：
B1 Ala-Phe-Gly-Lys
B2 Asn-Tyr-Arg
B3 Tyr- His-Val
（三）蛋白质的空间结构
1、概念
蛋白质的空间结构（或构象、高级结构）：指蛋白质分子中原子或基团在空间的排列分布和肽链的走向。包括二、(超二级结构、结构域）三、四级结构 。
构型（configuration）：指在立体异构体中取代原子或基团在空间的取向。两种构型间的转变需要共价键的断裂和重组。
COOH COOH
H2N C H H C NH2
R R
构象（conformation）:指取代原子或基团当单键旋转时可能形成的不同立体结构。这种空间位置的改变不涉及共价键的断裂。
概念
肽键平面或酰胺平面：由于肽键中C-N具有部分双键的性质，不能旋转，使得肽键中的四个原子和与之相邻的两个α-碳原子共处于一个平