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标题：包含弗林蛋白酶裂解序列的重组蛋白e23sFv-TD-tBID对
HER-2阳性肿瘤细胞的选择性毒性的研究
背景：,即人类表皮生长因子受体-2
2．HER2是一种膜表面结合酪氨酸激酶活性型受体。其涉及转导通路。该通路导小鼠的存活时间要长于未处理小鼠
用e23sFv-TD-tBID，赫赛汀处理的小鼠的存活时
间要长于用其它化疗药物处理的小鼠。同时也能看出，5mg/kg重组蛋白和10mg/kg赫赛汀效果一样。
讨论
1，我们的长远目标是研制一种可用于癌症治疗的重组蛋白
2，e23sFv-TD-tBID由一个抗HER2的抗体和截短型BID组成，他
们之间由弗林蛋白酶裂解序列连接，这样便加强了其杀伤细胞效果。
3，内吞体/溶酶体抑制剂和furin抑制剂可以显著降低
e23sFv-TD-tBID的细胞毒性，但跨高尔基网络抑制剂对其无效。表明e23sFv-TD-tBID在通过细胞质时通过内吞体/溶酶体处理加工，再被furin处理，而不是通过跨高尔基网络。
4，e23sFv-TD-tBID通过结合到细胞表面引发一系列复杂的步骤，包括内吞作用，水解，并进入靶细胞胞浆最后杀死细胞
在细胞质中其具体过程是，被激活的tBID锚定在线粒体膜，
从而导致不可逆转的线粒体损伤和细胞色素c的释放，诱导细胞凋亡。
注解：弗林蛋白酶(Furin)是类似细菌枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)和酵母Kexin的一种内切蛋白酶，在各种真核细胞中还发现了许多与Furin类似的同源物，这些同源物统称为前体蛋白转化酶，它们的共同特点是能切割前体蛋白，促进前体蛋白获得生物活性。Furin是一种由794个氨基酸组成的I型跨膜蛋白，Furin属于丝氨酸枯草杆菌蛋白酶超家族中前体蛋白转化酶家族成员。
Furin的另一种底物——胰岛素样生长因子1(insulin—likegrowthfactor一1，IGFl)在结肠、乳腺、肺以及前
列腺肿瘤中被上调。
记下来！
Thesedatasuggestthatrecombinante23sFv-TD-tBIDhastherapeuticpotentialfor
HER2-positivetumorsandwarrantfurthertestingforclinicalapplications
HER2
原癌基因人类表皮生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2,HER2)基因,即c-erbB-2基因,定位于染色体17q12-，编码相对分子质量为185000的跨膜受体样蛋白
,具有酪氨酸激酶活性[1]。是重要的乳腺癌预后判断
因子,HER2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗
模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。检测方法有免疫组化、FISH等。目前已
有针对该基因失活的药物…赫赛汀
HER2
的表达增加
还观察到结肠，前列腺癌，肺癌，胃癌癌症
BH3是什么：？凋亡相关蛋白中的Bcl-2家族是细胞凋亡的关键调节分子,由抗凋亡和促凋亡成员组成,这些成员之间通过相互协同作用调节了线粒体结构与功能的稳定性,从而在线粒体水平发挥着细胞凋亡的"开关",与促凋亡成员的BH3结构域相互作用对细胞凋亡发挥抵抗作用促凋亡成员则主要分布于细胞浆中,细胞接受死亡信号刺激后,促凋亡成员自身受到一系列的调节,如典型的Bax构象改变、BAD和Bik的磷酸化调节以及Bid和Bim的蛋白裂解效应等,使得促凋亡成员在凋亡信号的刺激下整合于线粒体外膜,最终导致线粒体通透转换孔的开放,进而释放包括细胞色素c、凋亡诱导因子、Smac等重要的凋亡因子，随后caspase
被激活进而断裂重要的细胞内结构蛋白与功能分子,执行细胞凋亡.，一些仅含BH3结构域的促凋亡蛋白，如BAD，Bik可以和抗凋亡蛋白Bcl-2结合的同时拮抗了Bcl-2的抗凋亡作用，从而使得Bid和Bim可以直接激活Bax
，导致Bax移位到线粒体并形成同源二聚体蛋白通道，这种插入到线粒体外膜的Bax通道足以促进细胞色素c的释放，接着导致caspase的激活和细胞凋亡tBID:?另外一种激活促凋亡蛋白的方式是促凋亡蛋白的断裂，最好的例证便是，仅含有BH3结构域的Bid对于死亡受体激活的应答中发挥了这种机制．
在此过程中，死亡受体激活了caspase-8，使得存在于胞浆中的非活性的Bid断裂形成具有活性的tBid，并转位到线粒体
断裂后的tBid向线粒体的转位增加了线粒体通透性
流式AnnexinV/PI法：
以1:4稀释bindingbuffer（50mLbuffer+150mL蒸馏水），在稀释的b