细胞培养实验写报告内容.docx

细胞培养实验写报告内容
1目的
2原理
3材料与方法（操作步骤）
4实验结果
5结论或结果分析 实验一
实验二
实验三 实验四
鸡胚原代成纤维细胞的制备与培养
滤泡性口炎^（VSV）的增殖（纯培养）
Hep-2细胞的传代0ml
含3 %小牛血清的
RPMI-1640 液或
DMEM 液
四、操作步骤
1、上述原代成纤维细胞培养24h后，一旦细胞完全贴壁生长良好后，则轻
弃培养上清，换上细胞维持液（含3%小牛血清的RPMI-1640）,接种200TCID50 ，在细胞瓶上标记换液时间，接种病毒量。正常对照也按照上述方 法换上维持液。
2、 再继续培养，每间隔12〜24h观察，直至全部细胞出现明显的病变，显 微镜观察细胞脱落，圆缩，则可停止培养。
3、 收集全班的病毒培养物于100ml无菌盐水瓶中，写好标记，置于一20°C 冰箱充分冷冻后再置于4°C冰箱或室温下解冻，该过程称为冻融。反复冻融三次 后，细胞膜破坏，释放出胞内病毒。低速离心，弃细胞碎片沉渣，收集上清即为 病毒悬液。留样测定病毒的tcid50。
五、实验结果
1、 鸡胚原代成纤维细胞的显微镜下观察。
2、 VSV攻击鸡胚原代成纤维细胞后，细胞病变效应（CPE）的观察。
3、 病毒收获的方法。
实验
Hep-2细胞的传代培养
一、 目的
掌握细胞传代培养的方法及其应用。
二、 原理
原代培养后由于细胞游出数量增加，细胞进行增殖，单层培养细胞相互汇合， 整个瓶底逐渐被细胞覆盖。这时需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足 或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的 培养瓶的过程称之为传代；进行一次分离再培养称之为传一代。
细胞培养传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传 代；部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹 打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。
三、 材料
名 称
数量
备 注
传代人喉癌上皮细胞（Hep-2）
1瓶/2人
VTP
1ml/2 人
DMEM 液
100ml/2 人
PBS
1瓶/8人
血清
5ml/2 人
5或10ml吸管
2支
1ml吸管
1支
细胞培养瓶
1只/2人
四、操作步骤
1、 将细胞生长面朝上轻轻倒掉上清，用PBS小心洗涤三次，注意吸管尖头 不要伸到细胞瓶中。
2、 用上述吸管吸取1ml VTP加入细胞瓶中，铺满整个细胞生长面即可；室 温或手握住消化，约3〜5min。当细胞胞质回缩、细胞间隙增大后，即可停止消 化，尽可能弃尽消化液，继续利用残余的消化液消化，直至细胞大部分易在外力 作用下从细胞瓶表面脱落下来为止。
3、 加入少量DMEM液细胞瓶中，用小头吸管吹打瓶壁细胞以及脱落细胞 充分使细胞均匀，吹打时动作要轻柔不要用力过猛，尽可能不要出现泡沫。吸一 滴细胞悬液于Ep管中。
4、 计数：用吸管吹打细胞悬液，%台盼兰混匀， 在计数板上盖玻片的一侧加该细胞悬液，加样量不要溢出盖玻片，也不要过少或 带气泡。计算细胞密度。用DMEM制备成1X106/ml的细胞悬液，并按10%的 量加入小牛血清。
5、 将上述细胞悬液分装5ml到新细胞瓶中，塞好塞子，送培养箱培养，24h 后观察。
以备实验五、六、七用。
实验五VSV TCID50滴定
(注：此实验和实验五、六同时进行)
一、 目的
掌握病毒tcid50滴定的基本原理和计算方法以及应用。
二、 原理
多数病毒感染体外培养的细胞后，常引起细胞形态学改变，如细胞团缩、裂 解和细胞肿大等，这种改变称为病毒致病变效应(cytopathic effect，CPE)，可以 直接通过显微镜观察，亦可通过染色得以识别和判断。CPE的程度可间接反映病 毒的毒力，因此利用这种特征可以用来测定病毒的毒力。即能在细胞培养板孔或 试管内引起半数细胞发生病变所需的病毒量定义为病毒的组织细胞感染指数
(tissue culture infection dose, TCID50)。
测定时，首先在微量细胞板上培养敏感细胞，待细胞贴壁形成单层，弃上 清。将待测病毒用维持液做10倍稀释后加入细胞单层，逐日观察，直至病毒产 生的CPE不再进展为止。具体时间根据病毒的增殖特点而定，如肠道病毒增殖 迅速，一般48h即可；VSV增殖也较快，因此，48h〜72h也可以观察、染色、计 算。
三、材料与器材
名 称
数量
备 注
Hep-2细胞
实验五传代所得，自备
/组
水泡性口炎病毒(