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高效液相色谱法的计算方法
高效液相色谱法是用高压输液泵将拥有不同极性的单调溶剂或不同比率的混淆溶剂、缓冲液
等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成
正确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分别度。分别度
（R）的计算公式为：2(t<[R2]>－t<[R1]>)R＝──W<[1]>＋W<[2]>式中t<[R2]>为相
邻两峰中后一峰的保存时间；t<[R1]>为相邻两峰中前一峰的保存时间；W<[1]>及W<[2]>
为此相邻两峰的峰宽。除此外有规定外，。
(3)拖尾因子为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子(T)是
否切合各品种项下的规定,或不同浓度进样的校正因子误差是否切合要求。拖尾因子计算公
式为：W<[]>T＝──────2d<[1]>式中W<[]>；d<
[1]>为峰极大至峰前沿之间的距离。除还有规定外，～。也可按各品种
校正因子测定项下，配制相当于80％、100％和120％的比较品溶液，加入规定量的内标溶
液，配成三种不同浓度的溶液，分别注样3次,计算平均校正因子，其相对标准偏差应不大
％。
，可根据样品的详细情况采用峰面积法或峰高法。但用归一法或内标
法测定杂质总量时，须采用峰面积法。(1)面积归一化法测定供试品（或经衍生化办理的
供试品）中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积归一法。计算各杂质峰面积
及其总和，并求出占总峰面积的百分率。但溶剂峰不计算在内。色谱图的记录时间应根据各
品种所含杂质的保存时间决定，除还有规定外,可为该品种项下主成分保存时间的倍数。
主成分自己比较法
当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用主成分自己比较法。在测定前，先按各品种项
下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为比较溶液，进样，调节检测器的灵
敏度或进样量，使比较溶液中的主成分色谱峰面积知足正确测量要求。然后取供试品溶液，
进样，记录时间，除还有规定外，应为主成分保存时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各
杂质峰面积及其总和并和比较溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。
内标法测定供试品中杂质的总量限度
采用不加校正因子的峰面积法。取供试品,按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供
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试品溶液,注入仪器,记录色谱图Ｉ;再配制含有内标物质的供试品溶液，在同样的条件下注
样，记录色谱图Ⅱ。记录的时间除还有规定外，应为该品种项下规定的内标峰保存时间的倍
数，色谱图上内标峰高应为记录仪满标度的30％以上，否则应调整注样量或检测器敏捷度。
如果色谱图Ⅰ中没有与色谱图Ⅱ上内标峰保存时间相同的杂质峰，则色谱图Ⅱ中各杂质峰面
积之和应小于内标物质峰面积（溶剂峰不计在内）。如果色谱图Ⅰ中有与色谱图