白藜芦醇通过线粒体途径减轻大鼠重症急性胰腺炎肺损伤.doc

白藜芦醇通过线粒体途径减轻大鼠重症急性胰腺炎肺损伤.doc白藜芦醇通过线粒体途径减轻大鼠重症急性胰腺炎肺损伤
作者:沙焕臣,拉吉姆,马清涌,徐复国,马振华
【摘要】目的: 探讨白藜芦醇(RES)对实验性重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤的保护作用及其机制. 方法: 32只成年雄性SD大鼠随机分为假手术(SO)组;SAP组;地塞米松(DEX)组和RES 治疗组. 各组大鼠在制模后12 h采集标本. 动脉血气分析检测动脉血氧分压(PaO2);酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清TNFα和IL6含量;透射电镜(TEM)观察肺脏超微结构变化;RTPCR检测凋亡调控基因Bax, Bcl2和Caspase3 mRNA表达;镜下观察结果显示,SAP组肺组织明显充血肿胀,并可见大量炎细胞浸润和细胞凋亡,线粒体肿胀明显;RES组肺组织病理损害程度较SAP组减轻;PCR结果显示,SAP组凋亡调控基因Bax, Caspase3 mRNA表达较SO组明显升高,Bcl2 mRNA表达降低,RES组Bcl2 mRNA表达较SAP组升高(P<),Bax, Caspase3 mRNA表达较SO组明显降低,a公司);RES(西安奥塞斯生物有限公司);TNFα,IL6 ELISA检测试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司);PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司);引物由上海生物工程技术服务有限公司合成;凋亡调控蛋白Bax,Bcl2,Caspase3,细胞色素c(Cytochrome c,Cyt c) mAb(美国Santa Cruz生物技术有限公司);辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠Ⅱ抗、小鼠抗βactin mAb(北京博奥森生物技术有限公司);线粒体提取试剂盒(上海杰美生基因医药科技有限公司);增强化学发光剂(美国Pierce生物技术有限公司);透射电镜(日本东芝公司).

(SO)组、SAP组、RES治疗组和地塞米松(dexamethasone, DEX)组,每组动物8只. 大鼠禁食12 h,禁水4 h,25 g/L戊巴比妥钠( mg/kg)腹腔注射麻醉. 动脉夹夹闭胰胆管近端和远端,40 g/L牛磺胆酸钠(1 mL/kg)经胰胆管逆行注射建立SAP模型,注射时间保持1 min,拔出穿刺针,取出动脉夹. SO组仅于开腹翻动十二指肠后缝合腹壁,胰胆管内不注射任何药物;在建立SAP模型后,经阴茎背静脉RES组立即注射RES 10 mg/kg;DEX组立即注射DEX mg/kg. 大鼠在制模后12 h剖杀取材.
,以10 mL无菌注射器收集大鼠腹水并计量. 大鼠死亡率计算方法为未到12 h死亡的大鼠从本组中排除,另选大鼠补齐,以死亡的大鼠数量和总计应用的大鼠数量比值计算大鼠死亡率.
mL,应用iSTAT全自动血气分析仪检测各组大鼠动脉血气分析.
α和IL6 ELISA检测应用ELISA检测试剂盒检测大鼠血浆中TNFα和IL6含量,详细步骤严格按照试剂盒说明书进行操作.
g/L多聚甲醛固定后,常