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灰绿葡萄孢发酵液中天然型脱落酸的分离纯化 维普资讯
中国抗生素杂志年月第卷第期· ·
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灰绿葡萄孢发酵液中天然型脱落酸的分离纯化
郑珩吴梧桐廖建民绪广林
中国药科大学, 南京
摘要: 对脱落酸产生菌灰绿葡萄孢发酵生产脱落酸的分离纯化工艺进行了初步探
索。发酵液经过滤、浓缩、去杂、乙酸乙酯萃取、反萃取、硅胶柱层析、结晶等步骤进行分离纯化可得
脱落酸,测定总收率可达.%。产品经光谱鉴定、旋光测定证实为天然型脱落酸,纯度在%以上。
关键词: 脱落酸; 发酵; 纯化
中图分类号: 文献标识码:
脱落酸,是一种重要的植物激素,它。
在植物的生长发育中起多方面的作用,在农业上有广. 发酵培养基
阔的应用前景【:如可促进或抑制种子发芽;抗作物加.%泡敌,其它同种子培养基。
倒伏;增强作物的抗旱性,抗寒性,耐盐性等。有关其. 仪器及试剂
机理的研究亦方兴未艾。含有一个不对称碳自控搅拌式发酵罐型,华东理工大
原子位,可形成两种旋光异构体,植物体内的天然学;—型自动指示旋光仪,上海物理光学仪器厂;
是右旋的,记为一,而化学合成法步骤脱落酸标准品从公司购买,其它试剂均为国产
长,且产物为多种消旋体混合物,需经手性拆分才能得分析纯。
到天然型,因而其成本居高不下,极大的限制了方法
它的研究应用。年,日本等首次报道微. 菌种的培养发酵
生物能产生天然型,为的生产开发提供了取菌丝粗壮的斜面种子,接种于液体种子培养基,
新的思路。国内此方面研究报道较少,且产量低。℃培养,以%的接种量倒入发酵培养基中,上罐
我们曾分离筛选到多株产生菌,并对其中一株培养。罐温℃,装液量.,通气量/,搅拌转
进行激光等方法诱变育种【,得到了高产菌株。速/,定期取样测定,发酵产量达高峰时放
本文拟对发酵液中的分离纯化工艺进行初步探罐。
索,以便为微生物发酵法大规模生产天然型奠定. 分离纯化工艺流程
基础。发酵液经预处理后过滤,浓缩至原体积的/,浓
材料缩液用./调,等体积乙酸乙酯萃取,
. 菌株水相用./调,等体积乙酸乙酯萃取两
脱落酸产生菌灰绿葡萄孢,本次,合并有机酯相,用等体积./反萃
室分离选育保藏的脱落酸高产菌。取两次,合并水相,再用./调,等体积
. 斜面培养基乙酸乙酯萃取两次,合并乙酸乙酯相,浓缩至干,粗品
培养基。用少量氯仿溶解,硅胶柱层析,氯仿:乙酸乙酯梯度洗
. 种子培养基脱,洗脱液浓缩结晶得脱落酸精品。
葡萄糖,.,.,, . 分离纯化工艺优化
.,维生素,谷氨酸单钠盐., 考察不同对去杂质及萃取收率的影响,在去
‘.,‘., 杂质一步中,分别将调至.、.、.、.、
,用水溶解后,调.,补水至.,分别测定用乙酸乙酯萃取去杂质后水相中脱落
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作者简介:郑珩,男,生于年,博士,从事微生物药物的研究和开发。本文参加第九次全国抗生素微生物药物学术会议交流。
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· · 灰绿葡萄孢发酵液中天然型脱落酸的分离纯化郑珩等
酸的含量,计算收率;萃取步骤中,分别将调至,硅胶填充高度为,洗脱剂为乙酸乙酯
.、.、.、.、.、.,测定收率。每点重复和氯仿混合溶剂,乙酸乙酯浓度逐渐加大,梯度洗脱,
次,取平均值。流速为//。收集洗脱液,硅胶薄层层
. 脱落酸含量测定方法析,展开剂为甲苯