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测定蛋白酶活力实验
一、 实验目的
加深了解酶活力的概念。
学习掌握测定蛋白酶活力的方法。
二、 实验原理
酶活力指酶催化某一特定反应的能力。其大小可用在一定条件下 酶催化反应进行一定时间后，反应体系中底物的减少量或产物的生成 量测定蛋白酶活力实验
一、 实验目的
加深了解酶活力的概念。
学习掌握测定蛋白酶活力的方法。
二、 实验原理
酶活力指酶催化某一特定反应的能力。其大小可用在一定条件下 酶催化反应进行一定时间后，反应体系中底物的减少量或产物的生成 量来表示。
酶活力单位是表示酶活力大小的重要指标。本实验规定酶活力单 位(U)为一定条件下每分钟分解1昭酪氨酸所需的酶量。
实验选用枯草杆菌蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸的反应体系。产物酪 氨酸在碱性条件下与Folin-酚试剂反应生成蓝色化合物，该蓝色化合 物在680nm处有最大光吸收，其吸光值与酪氨酸含量呈正比。
因此通过测定一定条件下产物酪氨酸的含量变化，可计算出蛋白 酶的活力。
三、 仪器和试剂
仪器：
恒温水浴锅、分光光度计、试管及试管架、干燥滤纸、玻璃漏斗。
原料
枯草杆菌蛋白酶：称取1g枯草杆菌蛋白酶粉，用少量L，磷酸缓冲 液溶解并定容至100mL，震荡15分钟，使充分溶解，干纱布过滤， 取滤液冰箱备用。使用时视酶活力高低用缓冲液适当稀释。
试剂
Folin-酚试剂：
在2L磨口回流瓶中加入钨酸钠(Na2WoO4 . 2H2O)100g，钼酸钠 (Na2WoO4 . 2H2O)25g，蒸馏水 700mL, 85%磷酸 50mL 以及浓盐酸 100mL，充分混匀后，微火回流加热10小时。再加入硫酸锂150g， 蒸馏水50mL和液漠数滴，摇匀后开口继续煮沸15min，以驱赶过剩 的漠。冷却后加蒸馏水定容至1000mL，过滤，溶液呈黄绿色，置于 棕色试剂瓶中暗处贮藏。使用前用标准NaOH溶液、酚酞为指示剂 标定酸度(约为2mol/L)，然后加水稀释至1mol/L，即可使用。

L氢氧化钠溶液
L碳酸钠溶液
10%三氯乙酸溶液
磷酸缓冲液：
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4. 12H2O)，用水定容至100mL(A液)； 称取磷酸二氢钠(Na2HPO4 .12H2O)，用水定容至100mL(B液)。 取A液84mL，B液16mL混合后，得到磷酸缓冲液，可长期存放。 临用时稀释10倍即可。
标准酪氨酸溶液(50昭/mL):称取 以烘干至恒重的酪氨酸，用L盐 酸约30mL溶解后，蒸馏水定容至250mL。
酪蛋白溶液%):，用L氢氧化钠溶液(20mL)溶 解，再用磷酸缓冲液定容到
250mL。
四、 操作步骤
（一） 酪氨酸标准曲线的制作
取6支试管（标号0, 1~5）,按顺序分别加入,，，，和 标准酪氨酸溶液， 再用水补足到，摇匀后各加入L碳酸钠，摇匀。依次加入Folin—酚 试剂，摇匀并计时，于30°C水浴锅中保温