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蛋白纯化试剂盒
介绍
试剂盒有10个重力流柱，而该柱在自然条件下纯化可重新装填Ni-IDA Sefinose TM 6
Fast Flow 和结合缓冲液，洗脱液。这10个柱子通过固定化金属亲和层析可用于纯化带组H ：不要用强酸或强碱调pH （沉淀风险）
5. 离心裂解液，转移至管中室温下12000 rpm×20 min，或4℃下离心（根据蛋白灵敏度）。
6. 收集上清并进行纯化或/和手机包涵体沉淀以作进一步处理。
7. 对于通过酵母，昆虫或哺乳动物表达系统分泌到培养基的蛋白。若有大量上清，用
硫酸铵沉淀收集蛋白，用1×PBS透析，然后装到柱中。如果上清不含那些会影响镍柱，例
如EDTA，组氨酸等，则可直接用柱使 子。对于细胞质中表达的蛋白，请使用其他商业试剂
或试剂盒(such as BSP020 Insect Cell Protein Lysis Buffer, BSP022, Animal Cells Protein Lysis
Buffer, BSP026 Yeast protein Lysis Buffer ) 或参考相关文献，然后通过将蛋白提取物和5倍体
积结合/洗涤液混匀来准备样品。其他比例也可用，使 但需要试验验证。

注意：你可将非澄清样品转至柱内（即省略上述步骤 5），。如果是这样，延长机械裂
解，例如超声 10 min。总纯化时间将因非澄清样的较高粘度而增加。

变性条件下，聚组氨酸标签蛋白质样品的准备（主要在包涵体内表达）
1. 用1×PBS 重悬细胞沉淀（约5 mL/mL沉淀）。且按上述方法超声破碎细胞。
2. 离心裂解液收集包涵体，12000 rpm×10 min。如果有必要则用1×PBS洗几次包涵体。
3. 再结合/洗涤缓冲液中溶解包涵体（约5 mL/mL沉淀），并室温下孵育30-60 min，同
质化或超声可助于充分溶解沉淀。
4. 12000 rpm×30 min以除去剩余不溶性物质，小心转移上清至干净管而不打散沉淀。

组氨酸标签重力纯化过程
每1 mL能处理的样品体积是10 mL。如果样品体积大于柱子的体积，则进行多次步骤知
道所有样品流过柱子。小心不能超过柱子所能结合的能力。
1. 平衡柱到工作温度。在室温或4℃下完成纯化。2. 取出底帽，移去顶帽。倒出多余的液体，夹住柱子并让其直立，使柱子的顶部朝上。
3. 将蛋白提取物和结合/洗涤液混匀，使总体积等于两个树脂床的体积。
4. 用两个树脂床体积的结合/洗涤液平衡柱子。-1 mL/min 的流速，让缓冲液从树
脂中排出。
5. 加大肠杆菌裂解液或蛋白提取物和结合/洗涤液的混合物到树脂上方，收集流出物到
管子。
6. 用两个树脂床体积的结