抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用.doc

抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用.doc抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用
Preparation and primary application of monoclonal antibody against benzylpenicillin
[Abstract] AIM: To develop monoclonal antibody(mAb) against benzylpenicillin and to establish a Sandethod for relative quantitative analysis of the allergen only in clinic. METHODS: Penicillin, as a kind of hapten, plete antigen and then munize BALB/c mice. Hybridoma cells secrecting mAb against penicillin the immunized mice monium sulfate precipitation. The specificity of the purified antibodies a cells stably secrecting mAb Ab had relative high affinity. The doubleantibody Sandethod Group A us Preparation. CONCLUSION: Nine hybridoma cell strains stably secreting mAb against benzylpenicillin Ab;doubleantibody SandAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法, 对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。方法: 将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠, 应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水, 用辛酸硫酸铵法纯化, 并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化, 建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。结果: 经细胞融合、筛选及克隆化, 共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株, 其中5株亲和力较高。建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法, 该方法灵敏度达到870U/L, %, %, %, 可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。结论: 成功地制备了抗青霉素的mAb, 并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。
[关键词]青霉素; 青霉噻唑基; 单克隆抗体; 双抗体夹心ELISA
青霉素因其高效、低毒的特点在临床上被广泛应用, 但其结构中的β内酰胺环很不稳定, 在溶液状态尤其是碱性条件下易开环与蛋白、多肽的氨基发生亲核反应生成稳定的青霉噻唑蛋白, 形成临床主要的过敏原[1]。青霉素类抗生素的过敏反应发生率居各种药物之首[2], μg即可使青霉素高度敏感者产生严重的过敏反应[3]。生理条件下青霉素开环后大约95%与蛋白质共价结合形成青霉噻唑基(benzyl penicilloyl, BPO)主要抗原决定簇, 而其他一些共扼物如