利用RNAi技术创建无标记基因的抗病毒转基因水稻.pdf

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意弓绋李勿巷勿帛独创性声明关于论文使用授权的声明时间:勿月芬同时间:土洲晟乱兹,/年莎月二雩日本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其它人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。导师签名:时间:
汰渊\础劳吒辫趿苦中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表介导无标记基因抗病毒水稻的培育论文作者植物病理学研究方向李莉培养单位芯克植物保护研究所职称硕单位专业论文题目李红伟植物病毒指导教师姓名签名评硕导口中国农业科学院植物王锡锋研究员博导口保护研究所人吴学宏副教授中韩成贵孙文献赵文生植物病理学一岛委员会议记录厥吴蓓蕾时间:.论文答辩时间地点地点:中国农科院植保所科研楼第会议室阅主/、●●
要摘介导法转化,且不含潮霉素鷉剐曰虻脑靥錺一助上,获得了霾缓股杆菌超毒力菌株中,通过遗传转化将两个独立的分别携带目的基因和助剐曰虻水稻是世界上最重要的粮食作物之一,占我国粮食生产和消费的%,在粮食安全和国民经济中占有举足轻重的作用。由水稻条纹病毒琑鸬乃咎跷埔犊莶∈我国粳稻种植区最重要的水稻病毒病害。流行年份,一般田块减产%~%,严重田块达%以上,甚至颗粒无收。近几年,由水稻黑条矮缩病毒引起的水稻黑条矮缩病再度爆发流行,一般田块发病株率ィ现靥锟榭筛叽ヒ上。在田间这两种病毒病常常混合发生、危害巨大。对于病毒病而言,最为经济有效的防治途径是利用品种自身的抗性达到主动控治病害的目的,然而传统的育种获得兼抗两种病毒病、高产、优质品种的难度极大。本研究采用转基因技术,首先构建含两种病毒保守序列的扇,靥澹门└司榈甲;境墒炫哂俗橹ü橹嘌竦转基冈再生植株,并初步进行了分子检测和抗病性鉴定,主要结果如下:⒎直鹂寺×薘和饪堑鞍珻基因的部分核苷酸片段—⒒竦枚叩拇F蜠@肦干涉载体系亩嗫寺∶盖形坏悖别将狧、和正向、负向插入,从而形成发夹结构,获得的干涉载体分别命名为/、/和/。由于上述干涉载体携带有氯霉素抗性基因,不适合农杆菌介导法的遗传转化,冈此再分别将上述龈缮嬖靥迳系姆⒓薪峁沽拥绞屎吓└司素标记基冈的载体,分别命名为/一籅和/一⒉捎盟ň辍⑺柿9沧;姆椒ǎ鴋抗性基冈的柿:筒恍剐曰虻膒籖、/一蚿驜籇质粒分别电击转化到农舱系剿灸J狡分职P竦幕蜃橹校康氖羌瓤梢栽赥ü股亟锌剐杂伤的筛选,又可以通过转基因再生植株后代分离,获得不含标记基冈的抗病毒材料。⒃谂└司鶨慕榈枷拢鲜鲈靥宸直鸬既胨酒分职P竦某墒炫哂俗橹校经潮霉素筛选,获得转双价载体鬒/一目剐杂俗橹个,分化得剑暝偕植株;获得转单价载体/一目剐杂俗橹个,分化得剑再生植株辏鹤单价载体/的抗性愈伤组织觯只玫株蒋生植株。⒍株转双价载体/一腡仓杲屑觳馐保9娴腜体系仅检测到株含目的基冈的障灾仓辏沧;饰%,与大多数报道的双菌双质粒介导的共转化率相近。应用本研究建立的巢式逑担株可检测出性植株辏沧;噬仙%,说明在双菌双质粒介导的共转化体系中共转化率可能会冈检测体系灵敏度的提高而提高。⒔;騎酌缫圃缘絉重发区河南郑州,选择田间自然发病严重的田快,通过自然发病进行了抗病性评价,移栽旌蟮牡鞑榻峁砻鳎鹤;靥錺/一闹仓棵中,其中曛毂硐种⒆,株表现轻微症状级瓯硐种械戎⒆级株严重症状株极严重症状。但受体发病严重,全部为騃叮⒉≈曷饰瑂,
ィ峁砻鳎壕」茏;蛩静煌晗导浯嬖诿飨缘目共⌒圆钜欤芴謇纯矗;蛩代植株的长势明显优于非转基冈受体植株,可以筛选到高抗闹晗怠D壳罢诮帐〗ê县和姜堰县分别对代材料进行抗蚏的抗病性评价。关键词:水稻条纹病毒,水稻黑条矮缩病毒,双价干涉载体,水稻遗传转化,去除标记基因
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录目第一章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一水稻条纹叶枯病和水稻黑条矮缩病的研究概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..咎跷埔犊莶〉〉难芯扛趴觥扇沤榈嫉目共《⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.门└司;参锏脑怼.≡癖昙腔蚣捌渖境本研究的目的及意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯