RelB基因沉默对骨髓树突状细胞生物免疫学功能的影响探究.pdf

第一军医大学
博士学位论文
RelB基因沉默对骨髓树突状细胞生物免疫学功能的影响研究
姓名:郑磊
申请学位级别:博士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:王前
20060602
胎馏基因沉默对骨髓树突状细胞生物免疫学功能的影响研究博士研究生:郑磊指导教师:王前教授、主任医师摘要目的:树突状细胞,哂屑せ蠲庖哂Υ鸹蛴盏济庖吣褪艿墓能,未成熟状态的村突状细胞倾向于诱导免疫耐受产生,被称为“致耐受薄N颐窃诔晒⑻逋饫┰龈叽慷刃∈蠊撬树突状鳐胞,.椒ǖ幕∩希最新的扇偶际,攵訢墒斓腘览低径中关键基因—次剩秆〕鲎罴训膕泶锟蛐蛄校糜诠菇基因沉默的,并从细胞形态、细胞表面分子表达、细胞免疫功能等方面对的生物免疫学特性进行了比较研究,以期构建出基因沉默的全新致耐受—,验证其诱导赴庖吣受特性及可能机制,为其成功用于治疗移植排斥反应及自身免疫性疾病提供可靠的理论和实验依据。方法:⒐撬鐳奶逋馀嘌爰ㄑ芯浚分离小鼠骨髓前体细胞,〔⒔岷免疫磁珠分选方法,培养扩增骨髓来源瓺,并通过细菌脂多糖碳び盏糄墒臁J笛榉殖闪阶椋孩貱—组::在培养结,.
水平和蛋白质水平检测比较各组的船旧基因表达情况,筛选出性赴傻等矫娑訰蒁纳锩庖哐匦越辛吮冉涎束前尤擘鰃/的碳さ腄赴闯墒霥椤7直鸫酉赴态、细胞表面分予表达以及同种混合淋巴细胞反应等方面鉴定体外培养的未成熟与成熟。⑹魍蛔聪赴鸕虺聊靶Ч觳庋芯浚根据杓圃蛟は壬杓段蛄校捎妹览萄艄泶锟蚴约梁校菇ǔ鱿嘤Φ种泶锟//:③/H咀椋河肦痵转染未成熟;④/H咀椋河肦痵转染未成熟;⑤/H咀椋用/H灸┏墒霥虎轌/H咀椋河肎/H疚闯熟,也即本实验的阴性对照组2捎肦拖赴庖哂ü夥椒ǚ直鹪基因沉默效果最好的有效蛄小虺聊允魍蛔聪赴纳锩庖哐Чδ苡跋煅芯浚在成功构建基础卜,实验分成四组:①瓺椋虎瓺椋籃基因沉默组瓺:第炀齊理的培养第斓腄虎躄刺激的基凶沉默组—.第炀齊砗徒崾凹尤胪庠葱訪/碳的培养第焓占腄7直鸫酉赴翁⑾赴砻娣肿颖泶铩⑾赴庖吖δ分泌、诱导赴鬃臃置凇⒒旌狭馨拖赴从Α⒂盏糃调节究。结果:⒃趓瓹和诱导下,可从小鼠骨髓培养扩增出大量,×觯耆闶笛樾枰!5ゴ坑璺ㄉ秆。—中粜月蚀ヒ陨希艚岷螩庖叽判韵赴盅》椒ǎ摘监,
%以上。橄赴翁辔T残危羼薅啵黄鸾仙伲赴饕采伲胞内较多吞饮泡,细胞表型检测类分子低水平表达,共刺激分子低表达,,胞内囊泡结构减少,线粒体,粗面、滑面内质网等细胞器均显著增多,表面有大量细长的树枝状突起。与相比,细胞表面共刺激分子呈高水平表达,分泌较灾龈碳细胞增殖能力显著增强禣.,呈现成熟特征。捎糜诠撬栉闯墒霥淖H臼笛椤允荆肓硗饬礁鑫坏阆比,/梢悦飨砸种葡赴鸕虮泶幌赴庖哂ü夥可见吞噬的异物,细胞核多偏向一侧,溶酶体和线粒体等细胞器少,表面突起少,形态较规则;,其中当疍碳ず驲分泌哪芰ο灾陀贚.,二者差异有显著性.,,显著抑制赴置析结果也显示/梢悦飨约跞鮎鞍妆泶锼健比例为::.。四组细胞分.。博宦畚
泌未见明显差异,,差异具有显著性.。度的,适合应用于的分子免疫学研究。胞基因表达,不影响细胞活力和形念,是最佳的候选形坏悖合用于构建与未成熟形态结构相似。细胞表达甀喾肿印缺砻娣肿酉对较低,允窘先醯拇碳细胞增殖能力。在细胞形态、细胞表面分子表达、细胞免疫学功能等方面与未成熟相似,具有致酣受特性,有望用于治疗移植排斥反应及自身免疫性疾病的防治。主要创新点:⒔⒓虮恪⑾喽跃玫奶逋獯蠊婺@┰龈叽慷裙撬枋魍蛔聪赴嘌法。改良⒌木涫魍蛔聪赴逋饫┰龇椒ǎ捎门嘌天手法筛力。结论:∈蠊撬枨疤逑赴趓瓹和诱导下,可扩增到大量的⑹址ㄉ秆〗岷螩阳性细胞免疫磁珠分选方法可以得到%以上纯痵泶锟蜃H綝梢栽趍偷鞍字仕矫飨砸种葡为圆形或椭圆性,胞内有大量囊泡结构,表面突起少,低水平分泌琈反应中诱导騎细胞偏倚,和甕分泌抑制,虸分泌相对占优势,同时诱导鹘谛訲细胞大量生成。。摘要
胎的比较研究,首次成功获得/为有效的&馏基因特异性沉默位点。目前国内外未见类似报道。⑹状喂菇ǔ雒筇虺聊珼