微生物检测菌落总数测定方法.pdf

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微生物学检验菌落总数的测定之巴公井开创作
时间:二O二一年七月二十九日
1原理
微生物活体数量的测定方法,
通过将样品制成均匀的一系列分歧稀释度的稀释液,再取一定的稀
释液接种,使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内,最后根据在
平板上长出的菌落数计算出每克(或mL)样品中的活菌数量.
2资料和仪器
:φ90mm.
:容量250mL,500mL.
:1mL(),10mL()或
微量移液器及吸头.
.
10倍系列稀释
.
.
.
.

3检验法式
菌落总数的检验法式见下图.
检样
10g样品+90mL无菌生理水,均质
时间:二O二一年七月二十九日
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方法①↙↘方法②选择至少3个适宜样品稀释均液
各取1mL分别加入无菌培养皿中,在培养皿中加入15mL~20mL平板计数
每皿中加入15mL~20mL平板计数琼脂培养基,
琼脂培养基,混匀,,涂布均匀.
↘↙
在36℃±1℃颠倒培养24~48小
时
计算各平板菌落数
计算菌落总数
4把持步伐

:LB培养基(最经常使用)
牛肉膏5g
卵白胨10g
氯化钠5g
琼脂20g
蒸馏水1L
将上述成份加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH值,分装锥形瓶
中,121℃高压灭菌30分钟.
:
,121℃高压灭菌
30分钟.
:
:称取10g固体样品置于盛有90mL无菌生理盐
时间:二O二一年七月二十九日
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水的无菌锥形瓶中(内装数粒无菌玻璃珠),在旋转式摇床
上200r/min充沛振荡30min,制成1:10的样品均液,即
101稀释液.
:10样品均液1mL(吸
取前需要摇匀1:10稀释液),缓慢加入盛有9mL无菌生理
盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不能触及稀释液
面),用漩涡振荡器振荡,混合均匀,制成1:100的样品稀
释均液.
,制备10倍系列样品稀释液,每递增
稀释一次,换用一次1mL无菌吸管或吸头.
,选择3~4个适宜稀释度的样品
均液(比如106,107,108,109稀释液).

接种方法1:
用1mL无菌吸管或微量移液器分别吸取分歧稀释度的菌悬液
1mL于一个无菌培养皿中(每个稀释度做三个重复),再在培养皿
中分别倒入10~15mL已融化并冷却至45~50℃的培养基,盖好平
皿盖子,趁热轻轻转动培养皿,使菌液与培养基充沛混合均匀,冷凝
后在恒温培养箱中颠倒培养24~28h,培养温度为36℃±1℃.
同时以无菌水作空白对比.
注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:108,109,1010.
接种方法2:
时间:二O二一年七月二十九日
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培养基平板上,将稀释液涂布均匀,吸附,在恒温培养箱中颠倒培养
24~28h,培养温度为36℃±1℃.同时以无菌水作空白对比.
()
注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:107,108,109.
可用肉眼观察,需要时借用放年夜镜或菌落计数器,

(colonyformingunits,CFU)暗示
~300之间,无蔓延菌落生长的平板计数菌
,年夜于300的可记录
.
,则不宜采纳,而应
以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不
到平板的一半,而其余一半菌落分布又很均匀时,即可计算半个平
板后乘以2,代表一个平板菌落数.
,则将每条单
链作为一个菌落计数.
,则此次检测结果无效,需重新测
定.
5菌落总数的计算方法
~100的适宜计数范围之间时,
计算三个平行的平均值,再乘以相应稀释倍数,作为每克中菌落总
时间:二O二一年七月二十九日
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数结果.
,其平均菌落数在30~100的适宜计数范围之
间,应按两者菌落数之比值来决定;若其比例小于2应计数两者的
平均数;若年夜于2则计数其中稀释度较小的菌落总数.
~100之间时,其中一
部份小于30或年夜于100时,则以最接近30或100的平均菌落数
乘以相应的稀释倍数计算.
~100范围较远时,建议选
择适合的稀释倍数重新测定.
表1样品活菌数量测定结果数据记录
样品菌落数(个)活菌数(cfu/g或cfu/mL)
平行1
平行2
平行3
平均
注意事项:检测过程中尽量防止环境杂菌干扰,把持人员要用
70%的酒精擦拭手和桌子.
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