植物生理指标测定方法.docx

该【植物生理指标测定方法 】是由【百里登峰】上传分享，文档一共【4】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【植物生理指标测定方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。植物生理指标测定方法
1、叶片持水率择植株上部枝条健康完整的定型叶,每种依据叶片大小摘取叶片,混均匀后分成三份即时称量鲜重,后置入40C恒温烘箱中,烘40min,取出称重,再置入85C烘箱中恒温烘至恒重。
离体叶片,在单位时间内,水分损失的大小,反映叶片持水能力的高低,水分损失越小,其叶片保水能力就越高,就越耐干旱。故失水率的大小,表示叶片持水能力的高低,失水率越小,其持水能力就越高。计算公式如下:
失水率=[(鲜重一40C烘40min重)+(鲜重一85C烘至恒重)]X00%。
2、植物暂时萎率测定观测植株叶片萎篇下垂、翌日晨不能恢复正常者,即取盆中土壤测定。其方法为,将植株连土团倒出,用小刮铲,小心而迅速从根的周围取土,剔除粗粒沙石及残根等杂物,装入已称重的备用铝盒,及时称重,带回室内置于105C烘箱内烘至恒重。取样后,及时复盆并淋透水,置于棚内继续养护,观察能否生还,如能生还,数据可用,如果植株死亡,则需重做。每种植物每次测试一盆,(做3次重复)按下式计算暂时萎釜率:
暂时萎釜率=[(土壤湿重—土壤干重)土壤干重]>100%o3、叶片相对含水量取各植株相同部位叶片,首先测定植物叶片的鲜重M1,后将叶片浸入蒸储水中5-6h,使叶片吸水达到饱和状态,取出擦干叶片至表面无水分残留,再称重,得植物叶片的饱和鲜重M2,最后将植物叶片放进烘箱,105C杀青半小时,再于85C环境下烘至恒重,得叶片干重M3。
叶片相对含水量按公式计算。
悯寸含水里=关专'<】0<加
式中:M1:为叶片的鲜重,M2为叶片的饱和鲜重,M3为叶片干重4、相对电导率用DDS—6700型电导率仪测定,取各植株相同部位叶片,用蒸储水拭净叶片表面和背面,用剪刀去除叶片中脉,余下部分剪成大小为5mr^5mm的叶片。,放于真空干燥器中,用真空泵抽气10min,以抽出细胞间隙空气。
缓慢放入空气,水即渗入细胞间隙,叶片变成透明状,细胞内溶质易于渗出。取出锥形瓶,间隔几分钟振荡一次,在室温下保持30min。用已经事先预热好的电导仪测定电导率L1,再将加塞锥形瓶转入沸水中,水浴20mins,取出冷却至室温后测定电导率L2。
细胞膜相对透性(相对电导率)按公式计算。
细胞膜相对谜性==«00入
式中:L1为叶片煮沸前外渗液的电导值;L2为叶片煮沸后外渗液的电导值5、可溶性糖的测定试剂:蕙酮乙酸乙酯一1g蕙酮溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中(黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解。
标准曲线的制作:
1%蔗糖标准液一蔗糖于80C下烘至恒重,。加少量水溶解,转入100ml容量瓶中,,定容至刻度。
100mg/L蔗糖溶液一吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中,定容至刻度。
取20ml刻度试管11支,从0~10分别编号,按表1加入100mg/L蔗糖溶液和水,除空白外,各浓度均重复二次。
管号
0
1-2
3-4
5-6
7-8
9-10
100mg/L蔗糖(ml)
0





水(ml)






蔗糖加入量(两
0
20
40
60
80
100
加完溶液后,。浓硫酸要沿管壁缓缓加入,然后将试管轻摇一下,待乙酸乙酯水解后,再充分摇动试管数次(注意勿将硫酸溅出),使液体混匀,立即放入沸水浴中准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm波长下测其光密度,以糖含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线。
并求出标准曲线的直线的方程。
可溶性糖的提取:取新鲜植物叶片,擦净表面污物,~,共5份,分别放入5支刻度试管中,加入5~10ml蒸储水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25ml容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。
样品测定:准确吸取样品提取液或水解液2ml于大试管中,2ml样品液中总含糖量应在20100间,若超出此值,则应稀释样品液(或减少样品液用量,然后加水使液体总量达到2ml),以下步骤与标准曲线测定相同。根据所测光密度查标准曲线,即可得出每ml样品液中碳水化合物总量。
计算可溶性糖含量:
可溶性糖含量(%)=CWXn/(106a双
式中C一标准方程求得糖量(g)V—提取液量(ml)a一吸取样品液体积(ml)n一稀释倍数W一组织重量(g)6、脯氨酸的测定试剂:80%乙醇;%酸性前三酮显色液:(3:2混合)搅拌加热(70C)溶解,贮于冰箱中;6mol/L磷酸::,蒸储水溶解后定容至250ml,其浓度为100g/,1ml,2ml,3ml,4ml,5ml放入25ml的容量瓶中,用蒸储水定容,即成2g/ml4g/ml,8g/m]12g/ml16g/ml,20g/ml的脯氨酸标准液。
取7支具塞刻度试管按表1加入各试剂。混匀后加玻璃球塞,在沸水中加热1h。以“0管为对照在波长520nm下比色。
管号
0
1
2
3
4
5
6
标准脯氨酸量(ml)
0
2
2
2
2
2
2
冰乙酸(ml)







菌三酮(ml)







脯氨酸含量(11g)
0
2
4
8
12
16
20
以光密度值为纵坐标,脯氨酸含量为横坐标,绘制标准曲线,求线性回归方程。
样品测定:
脯氨酸提取:~,加入适量80%乙醇、少量石英砂,于研钵中研磨成匀浆。匀浆液全部转移至10ml刻度试管中,用80%乙醇洗研钵,将洗液移入相应的刻度试管中,最后用80%乙醇定容至刻度,混匀,80C水浴中提取20min。
除去干扰的氨基酸:,强烈震荡5min,过滤,滤液备用。
脯氨酸含量测定:吸取上清液2ml,加2ml冰乙酸和2ml前三酮,于沸水浴中加热1h。以空白管为对照,在波长520nm下比色测定。
结果计算:从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度,按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数:
脯氨酸(质量分数)=CXVt/WWsX106
式中C一提取液中脯氨酸含量(^0,由标准曲线求得;
Vt一提取液总体积(ml);
Vs一测定时所吸取提取液的体积(ml);
W一样品重量(g)。
7、POD的测定试剂:20mmol/LKH2PO4—;()—(。溶于500ml水中)(-12H2O溶于500ml水中);反应混合液一100mmol/L磷酸缓冲液()50ml,加入愈创木酚28ul,于磁力搅拌器上加热搅拌,至愈创木酚溶解,冷却后加入30%过氧化氢19ul,混合保存于冰箱中。
粗酶液的提取:称取植物(小麦叶片)材料1g,加20mmol/LKH2PO45mL,于研钵中研磨成匀浆,以4000r/min离心15分钟,收集上清液保存在冷处,所得残渣再用5mLKH2PO4溶液提取一次,全并两次上清液。
酶活性的测定:取比色皿2只,于一只中加入反应混合液3mL,1mLKH2PO4,作为校零对照,另一只中加入反应混合液3mL,上述酶液1mL(如酶活性过高可适当稀释),立即开启秒表,于分光光度计470nm波长下测量OD值,每隔1min读数一次。以每分钟OD变化值表示酶活性大小,1即以AOD470/(或鲜重g)表示。
(u)表示。
过氧化物酶活性[u/()]=
式中:M470—反应时间内吸光度的变化。W一植物鲜重g。
VT—提取酶液总体积,mL。Vs测定时取用酶液体积,mL。t一反应时间,min。
8、SOD的测定试剂:
();130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液:;750mol/LM蓝四哩溶液:;100卬mol/LEDTA-Na2溶液:-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml;20mol/La黄素溶液:(当天配制)。
方法:
酶液提取取一定部位的植物叶片(视需要定,去叶脉),加1ml磷酸缓冲液在冰浴下研磨成浆,转移到
5ml离心管中,加缓冲液使终体积为5ml。于10000rpm下离心10分钟,上清液即为SOD粗提液。
显色反应取5ml试管(或指形管,要求透明度好)4支,2支试管为测定管,另2支为对照管,按表1加入各溶液。
混匀后将1支对照管置暗处,其他各管置于4000lx日光灯下反应20min(要求各管受光情况一致,反应室的温度高时反应时间可以缩短,温度低时反应时间可适当延长(温度范围30~37C)。
表1各溶液加入量
试剂(酶)
用量(ml)
终浓度(比色时)
-Na2液20iimol/L核黄素酶液蒸熠水







13mmol
75卬mol
10卬mol

对照管加缓冲液代替酶液
总体积

SOD活性测定与计算至反应结束后,以不照光的对照管作空白,在560nm下分别测定其它各管的光密度值,SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示。按下式计算SOD活性。
(才dt—Ae)xV
SOD总活性

单位:酶单位/g鲜重表示;Ack一照光对照管的光密度值;AE一样品管的光密度值;V—样液总体积(ml);a一测定时样品用量(ml);W一样重(g);9、丙二醛试剂:();20%三氯乙酸(TCA);%硫代巴比妥酸,先加少量的氢氧化钠(1mol/L)溶解,再用20%的三氯乙酸定容。
方法:
MDA的提取:-,,研磨至匀浆,再加适量磷酸缓冲液进一步研磨,匀浆转移到5ml离心管中,在6000rpm离心15min,上清液为样品提取液。
(),%TBA溶液,混匀物于沸水浴上反应20min,迅速冷却(可将水浴后的材料置于冷水中)后再离心。取上清液测定532nm、600nm和450nm波长下的光密度。
计算含量
MDA3mol/g)=((D532-D600)-)*总提取液体积/(吸取体积*鲜重)