A001 SOD说明书05.3.11-1222.doc

A001 -1222
超氧化物歧化酶(SOD)测试盒
货号:A001
目录
试剂盒的介绍………………………………………………………………………2
测定意义……………………………………………………………………………2
测定原理……………………………………………………………………………2
试剂盒有效期和保存条件…………………………………………………………2
实验中所需的仪器和自备的试剂…………………………………………………2
总SOD的测定……………………………………………………………………3
高脂血症血清(浆)中SOD的测定……………………………………………6
红细胞中SOD的测定……………………………………………………………9
总SOD与分型SOD的测定方法
⒈抽提法测CuZn-SOD………………………………………………………………12 ⒉SDS和KCl抑制Mn-SOD测定CuZn-SOD ………………………………………16 ⒊KCN抑制CuZn-SOD测定Mn-SOD ………………………………………………19
参考值……………………………………………………………………………22
注意点……………………………………………………………………………22
试剂盒优点………………………………………………………………………23
附录:SOD标准曲线的制备…………………………………………………….24
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试剂盒的介绍
本试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)活力,可测血清(浆)、脑脊液、胸水、腹水、肾透析液、尿液、红细胞、白细胞、血小板、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物组织细胞及亚细胞水平(线粒体、微粒体)中的SOD活力,并可检测微生物、药物、食品、饮料、化妆品中的SOD活力。既适用于常规检验工作,又能满足科研工作的需要。
测定意义
超氧化物歧化酶(SOD)对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用,此酶能清除超氧阴
-离子自由基(O)保护细胞免受损伤。因而SOD活力的高低与衰老、肿瘤、炎症、自身免疫病、·2. 血液病、心血管病、肾脏病、消化系统疾病、辐射、药物作用等有着密切的联系,对疾病的病因学
探讨、诊断、治疗、术后的观察有着重要意义。
测定原理
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基(O2·), 后者氧化羟胺形成亚硝
酸盐,在显色剂的作用下呈现紫红色,用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时, 则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用,使形成的亚硝酸盐减少,比色时测定管的吸光度值低
于对照管的吸光度值,通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。
高等动物细胞内只有二种SOD即铜锌-SOD(CuZn-SOD)与锰-SOD(Mn-SOD), 二者相加等于总SOD(T-SOD)。KCN可抑制CuZn-SOD活力,而Mn-SOD活力不变,而经样本前处理过的样本中Mn-SOD活力丧失,但CuZn-SOD活力不变。
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试剂盒有效期和保存条件
本试剂盒保存期:6个月;贮存温度:4℃,注意4号试剂不可放在0℃以下,否则酶会失效,所用塑料吸嘴尖要干净,最好消毒,或者用蒸馏水将新吸嘴尖头反复冲洗,一定要避免菌类及重金属离子污染。
实验中所需的仪器和自备的试剂
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3.
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5.
6.
2 550nm的分光光度计 37℃恒温水浴锅台式离心机微量式移液器蒸馏水冰醋酸(分析纯)
总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力的测定
一、试剂的组成与配制:
(一)、100管试剂盒的组成与配制:
1、试剂一:贮备液:10ml×1瓶(天冷时或放冰箱会有部分结晶析出,需热水浴溶解后再用);
试剂一应用液的配制:用时每瓶加蒸馏水稀释至100ml,4℃保存。
2、试剂二:液体10ml×1瓶,4℃~10℃保存。
3、试剂三:液体10ml×1瓶,4℃~10℃保存。
4、试剂四:液体350μl×2支,4号稀释液5ml×2瓶,4℃保存。
用时二者按1∶14稀释,可以一次稀释,也可以分次稀释。配好的试剂四4℃保存,不可冷冻。配好后可保存2~3个月。注:所用吸嘴最好为专用且消毒处理过。
5、试剂五:粉剂×1支,用时加70℃~80℃热双蒸水75ml溶解后备用,若加热过程中水分蒸发减少,
此时必须用蒸馏水补充至75ml,配好后的试剂避光4℃冷藏。
6、试剂六:粉剂×1支,用时加蒸馏水75ml溶解后备用,配好后的试剂避光4℃冷藏保存。显色剂的配制:按照试剂五∶试剂六∶冰乙