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食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定 
发布单位:太原市质量技术监督局
报送时间:2007年12月19日  扫瞄次数:342
附件1
食品卫生微生物学检验
菌落总数测定
1 范围
本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。
本标准适用于各类食品中菌落总数的测定。
2 术语
菌落总数是指食品检样经过处理,在肯定条件下培育后(如培基成分、培育温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。本方法规定的培育条件下所得结果,只包括一群在养分琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观看细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时供应依据。
3 引用标准
GB/ 食品卫生微生物学检验 染色法、培育基和试剂
4 设备和材料
冰箱:0~4℃。
恒温培育箱:36±1℃。
恒温水浴锅:46±1℃。
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
均质器或灭菌乳钵。
架盘药物天平:0g~500g,。
菌落计数器。
放大镜4X。
:1mL()、10mL()。
:500mL。
。5mm。
:直径90mm。
。16X16mm。
:容量为500mL。
。
试管架。
酒精灯。。
灭菌镊子、灭菌刀或剪子等。
5 培育基和试剂
养分琼脂培育基:按GB/。
磷酸盐缓冲稀释液:按GB/。
%灭菌生理盐水。
75%乙醇。
6 检验程序
菌落总数的检验程序如下。
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
检样
→
 
选择2~3个适宜的稀释度各取1mL分别加入灭菌培育皿内
做成几个适当倍数的稀释液
每皿内加入适量养分琼脂
 
 
 
 
 
 
 
 
 
菌落计数
36℃±1℃48h±2h
 
报告
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
 
 
 
 
7 操作步骤
检样稀释及培育
,取样25mL或25g放入225mL灭菌生理盐水中,经充分振摇作成1:10均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后,最好置均质器中以8000r/min~10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁缓缓注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(留意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成1∶100的稀释液。
另取1mL灭菌吸管,按上条操作挨次,做10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1mL火菌吸管。
依据食品卫生标准要求或对标本污染状况的估量,选择2~3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
稀释液移入平皿后,应准时将凉至46℃养分琼脂培育基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀。同时将养分琼脂培育基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对比
待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培育48±2h。
菌落计数方法
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在登记各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
菌落计数的报告
平板菌落数的选择
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应接受两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜接受,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落;假如有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。
稀释度的选择
应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表1中例1)。
若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视两者之比如何来打算。若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)。
若全部稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。
若全部稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5)。
若全部稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表1中例6)。
若全部稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例7)。
菌落数的报告
菌落数在100以内时,按其实有数报告,大于100时,接受两位有效数字,在两位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示(见表1中“报告方式”栏)。

表1稀释度选择及菌落数报告方式
例次
稀释液及菌落数
两稀释液
之比
菌落总数
[cfu/g(mL)]
报告方式
[cfu/g(mL)]
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
10-1
10-2
10-3
1
多不行计
164
20
-
16400
4
2
多不行计
295
46
37750
4
3
多不行计
271
60
27100
4
4
多不行计
多不行计
313
-
313000
5
5
27
11
5
-
270
2
6
0
0
0
-
<1X10
<10
7
多不行计
305
12
-
30500
4
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
附件2
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
 
GB/-2003
食品卫生微生物学检验
大肠菌群测定
 
1 范围
本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。
本标准适用于食品中大肠菌群的测定。
2 术语
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
3 引用标准
GB/ 食品卫生微生物学检验 染色法、培育基和试剂
4 设备和材料
温箱:36±1℃。
冰箱:0~4℃。
恒温水浴:±℃。
天平。
显微镜。
均质器或乳钵。
平皿:直径为90mm。
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
试管。
吸管。
广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。
玻璃珠:直径约5mm。
载玻片。
酒精灯。
试管架。
5 培育基和试剂
乳糖胆盐发酵管:按GB/。
伊红美蓝琼脂平板:按GB/。
乳糖发酵管:按GB/。
EC肉汤:按GB/。
磷酸盐缓冲稀释液:按GB/。
生理盐水。
革兰氏染色液:。
6 检验程序
大肠菌群检验程序如下:
(图略)
稀释
检样
乳糖胆盐发酵管
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
36℃±1℃48h±2h
 
 
 
 
 
 
 
 
产气
大肠菌群阴性
伊红美蓝琼脂平板
36℃±1℃48h±2h
 
不产气
报告
革兰氏染色
乳糖发酵管
36℃±1℃48h±2h
 
革兰氏阳性
革兰氏阴性无芽胞杆菌
产气
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
不产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
大肠菌群阴性
报告
报告
报告