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癌胚抗原试剂
概述
癌胚抗原(CEA)是一种肿瘤相关抗原,由Gold和Freemn于1965年首次提出,该抗原为一糖蛋白,B电泳测得分子量200000由一单链蛋白(约800个氨基酸)及糖测链组成,糖量部分占总分子量的50%到80%。
Thompson等发展的放免(RIA)可以检测到在循环血和其它体液以及正常和病态组织中非常低的CEA浓度。两年后,Hansen等对RIA测定CEA做了改进。近年来,敏感而相对简便的CEA酶免法已被采用。
CEA首先被认为是结肠腺癌的一特异抗原。更新的研究表明CEA存在于许多胃肠或肺等来源于外胚层组织的癌细胞中,结肠粘膜分泌物中也报道有少量CEA。另外在非黄疸病人正常胆汁中报道有CEA类似物质。
CEA检测对于监测治疗后伴有血循环CEA持续升高的病人具有重要价值,高CEA浓度预示有潜伏的癌细胞转移或残留。CEA值持续升高可能与发展性癌症和不良治疗反映相关。CEA值下降通常表示预后和治疗反映良好。
CEA测定用于临床上对患有结肠,乳腺,肺,前列腺,胰腺,卵巢及其它组织肿瘤的病人的随访管理。对患有结直肠,乳腺癌,肺癌病人的随访研究提示术前CEA水平有预后作用。原理
微孔CEA酶免法为基于夹心法原理的固相酶联免疫检测方法。包被有抗
CEA的微孔与标本(或适当的标准品或质控)和酶标抗体溶液一起温育。若标本中有CEA抗原,则抗CEACEA抗体一辣根过氧化物酶结合物CEA抗原结合微孔上形成抗体-抗原-抗体复合物,未结合的酶结合物洗涤除去。然后,抗原-抗体复合物与酶底物溶液(过氧化氢和TMB)保温产生颜色。加入IN硫酸终止酶反应。用酶标仪在450nm读记吸光度与在测定工作范围内的标本CEA浓度成正比。
试剂组成
1、 CEA包被微孔板:1块。
2、 CEA酶结合物:1瓶。
3、显色A、B:各1瓶。
4、 CEA标准品:7瓶,浓度分为:0,4,10,30,60,120,240ng/ml。
5、终止液:1瓶。
6、浓缩洗涤液:1瓶,使用时1:10倍稀释。
操作步骤
1、每次试验应有一孔作为空白对照,调节酶标阅读仪的零点用。
2、反应板分别加入CEA标准品,各50ul,第一孔作为空白,其余各孔加入待测血清50ul,各孔内加酶结合物50ul,置37℃温育1小时。
3、弃去孔中液体,用洗涤液洗涤五次,拍干。
4、加显色液A、B,每孔1滴,