第一链cDNA合成试剂盒Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 中文说明书.doc

第一链cDNA合成试剂盒Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 中文说明书
第一链cDNA合成试剂盒Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit中文说明书 2013-12-07 13:20:16
Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒包装与含量小瓶/瓶盖标签适用于 a) 04 379 012 001 b) 04 896 866 001 c) 04 897 030 001
1
红色
Transcriptor
Reverse
Transcriptase(逆转录酶)
a) 1瓶,25 μl (20 U/μl)
b) 1瓶,50 μl (20 U/μl)
c) 2瓶,各50 μl (20 U/ μl)
? 储存缓冲液:200 mM 磷酸钾,2 mM 二硫苏糖醇,% Triton X-100(v/v),50% 甘油(v/v),pH
2
无色
Transcriptor RT
Reaction Buffer(5×)
(逆转录缓冲液)
a) 1瓶,1 ml
b) 1瓶,1 ml
c) 2瓶,各1 ml
? 5×浓度:250 mM Tris/HCl,150 mM KCl,40 mM MgCl2,(25°C)
3
无色
Protector
RNase Inhibitor
(RNase抑制剂)
a) 1瓶,50 μl(40 U/μl)
b) 1瓶,100 μl(40 U/μl)
c) 2瓶,各100 μl(40 U/μl)
? 储存缓冲液:20 mM Hepes-KOH,50 mM KCl,8 mM 二硫苏糖醇,50 % 甘油(v/v),pH (4°C)
4
黄色/
紫色
Deoxynuc-leo-tide
Mix
(dNTP)
a) 1瓶,100 μl(黄色瓶盖)
b) 1瓶,200 μl(紫色瓶盖)
c) 2瓶,各200 μl(紫色瓶盖)
? dATP, dCTP, dGTP, dTTP各10 mM
5
蓝色
Anchored-oligo(dT)18
Primer
(锚定oligo(dT)18引物)
a) 1瓶,100 μl(50 μM)
b) 1瓶,200 μl(50 μM)
c) 2瓶,各200 μl(50 μM)
6
Random Hexamer
a) 1瓶,100 μl(600 μM)
蓝色
Primer(随机引物)
b) 1瓶,200 μl(600 μM)
c) 2瓶,各200 μl(600 μM)
7
绿色
Control RNA
(对照RNA)
a) 1瓶,20 μl(50 ng/μl)
? 包含提取于永生细胞系(K562)的总RNA片段稳定溶液
8
绿色
Control Primer Mix PBGD
(对照基因引物)
a) 1瓶,40 μl
? 5 μM 人类PBGD特异性正向与反向引物
9(b和c为瓶7)
无色
Water, PCR-grade
a) 1瓶,1 ml
b) 2瓶,各1 ml
c) 3瓶,各1 ml
注意:货号为04 896 866 001和04 897 030 001的产品不含有control试剂(瓶7和瓶8),因此瓶7即为Water, PCR-grade。
储存条件及其稳定性
请将该产品存放于-15~-25°C条件中,并于产品标签上的有效期之前使用。注意:Control RNA(货号04 379 012 001的瓶7)应储存于-70°C条件。请避免将产品反复冻融! 2 产品使用方法
实验前准备
样本材料
RNA模板:分离的总RNA,mRNA,病毒RNA或体外转录的RNA。
注意:想要得到较好的RT结果,使用高质量完整的RNA(不含基因组DNA残留、RNA酶、抑制剂)是必要的。请根据以下预防措施进行操作,避免使RNA在分离过程中受到RNA酶的污染(从细胞裂解开始):
- 使用RNA酶抑制剂(如Protector RNase Inhibitor)或在使RNA酶失活的分离条件下进行操作。- 如果有必要,用凝胶电泳分析过程中不同步骤(裂解、分离)以确保样本中不含有RNA酶。- 请记住RNA酶也可能出现在受到污染的玻璃容器中。
为了准备总RNA或mRNA,我们建议您使用罗氏应用科学部的试剂。为了筛选出