角质细胞生长因子促进人胚神经干细胞增殖与分化的实验研究.pdf

·1246· Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, October 2013, Vol. 27,
角质细胞生长因子促进人胚神经干细胞增殖
与分化的实验研究
阳运康# 蒋电明 阳明明
【摘 要】  目的 探讨人源性角质细胞生长因子 2(human keratinocyte growth factor 2,hKGF-2)对体外长期培
养人胚神经干细胞(human neural stem cells,hNSCs)存活和分化的影响。 方法 将液氮冻存 17 代 hNSCs 复苏常规培
养 7 d 形成神经球后,取少许行免疫细胞化学染色鉴定干细胞及分化细胞特异抗原。一部分神经球浓缩后种植至 12 孔培
养板中,分为 7 组,每组 6 孔,均添加 1 mL 基础培养液[ 含 N2(1 ∶ 100)、 20 ng/mL EGF 的 DMEM/F12 培养基] 后,B、
C、D、E、F 组分别添加 10、30、60、90、120 ng/mL KGF-2,G 组添加 10 ng/mL bFGF,A 组为空白对照组;培养 7、14 d 观
察并计数神经球与 hNSCs,了解神经球生长与增殖情况。另一部分浓缩后种植至置有多聚赖氨酸包被玻片的 6 孔培养板
内,分为 4 组,每组 6 孔,均添加 3 mL DMEM/F12 培养基后,A1、B1、C1、D1 组对应加入 N2(1 ∶ 100)、 N2(1 ∶ 100) +
90 ng/ mL hKGF-2、FBS(1 ∶ 20)、 FBS(1 ∶ 20)+ 90 ng/mL hKGF-2;培养 14 d 内观察神经球生长与分化情况。7 d
时各取 5  孔玻片行免疫荧光细胞化学鉴定和流式细胞仪检测,分析神经球的生长与分化状况。 结果 复苏后培养形
成的神经球含大量巢蛋白阳性细胞,充满整个神经球;诱导分化后表达分化细胞特异性蛋白神经丝 200(neurofilament
200,NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)。各组神经球培养 7 d 后均有不同程度增大;随
hKGF-2 浓度增加,神经球数量和 hNSCs 数目均依次增多,呈递增趋势,E、F、G 组显著高于 A、B、C、D 组( P < ); B、
C、D 组间两两比较差异亦有统计学意义(P < ); 但 A、B 组间以及 E、F、G 组间比较差异无统计学意义(P > )。
体外诱导过程中,A1、B1、C1、D1 组分化细胞生长旺盛程度呈递增趋势,组间比较差异均有统计学意义(P < ); B1 组
NF-200 阳性率显著高于其余 3 组( P < ), GFAP 阳性率显著低于其余 3 组( P < ); A1、C1、D1 组间比较差异均
无统计学意义(P > )。培养 14 d 后各组生长均达峰值,以星形细胞为主。 结论 体外培养 17 代的 hNSCs 系纯化
hNSCs,hKGF-2 能促进其增殖和诱导分化为神经元细胞。
【关键词】  人源性角质细胞生长因子 2