家蚕表皮酪氨酸酶型和漆酶型酚氧化酶分离纯化及其酶学性质探析.pdf

苏州大学
硕士学位论文
家蚕表皮酪氨酸酶型和漆酶型酚氧化酶分离纯化及其酶学性质
研究
姓名:马晓春
申请学位级别:硕士
专业:遗传学
指导教师:许维岸
20090501
、、、对家蚕表皮酪氨酸酶昆虫黑化在昆虫表皮硬化、色素形成、.伤口愈合以及抵御病原微生物侵染等过程中起重要作用。黑化是由酚氧化酶催化一系列酚类物质被氧化还原生成醌类物质,醌再经过非氧化还原反应最终生成黑色素反应过程,酚氧化酶是这一过程的关键酶,7友趸赴ɡ野彼崦感推崦型酚氧化酶..1狙芯恳约也砥の2牧希蟹友化酶分离纯化和酶学性质研究,可为研究昆虫表皮生成、免疫以及以该酶为靶标新型害虫抑制剂提供理论依据。本试验主要结果如下:也媳砥し友趸阜掷氪炕=峁砻鳎豪野彼崦感头友趸富盍υ硫酸铵饱和度时,盐析得到的蛋白质沉淀酶活力最高;漆酶型酚氧化酶活力在.%硫酸铵饱和度时,盐析得到的蛋白质沉淀酶活力最高。然后又用汗瞬阄龆约也媳砥し友趸附写炕>;漆酶型酚氧化酶活力提高了丁友趸富久秆灾恃芯俊=峁砻鳎杭也媳砥だ野彼崦感头友趸缸适为,最适温度为℃,且热稳定性强;漆酶型酚氧化酶最适为,最适温度为℃,热稳定性较差。酪氨酸酶型酚氧化酶催化邻苯二酚和分别为..·甿。漆酶型酚氧化酶催化,,而高浓度对其有一定抑制作用。够笛K嵋种贫ρа芯俊?够笛K崮芤种萍也媳砥だ野彼崦感秃推崦感酚氧化酶活性,其直鹞和。以邻苯二酚为底物,抗坏血酸对家蚕表皮酪氨酸酶型酚氧化酶显示不可逆抑制;以为底物,抗坏血酸对家蚕表皮漆酶型酚氧化酶显示不可逆抑制。仕嵋种贫ρа芯俊D仕崮芤种萍也媳砥だ野彼崦感秃推崦感头友化酶活性,其直鹞R粤诒蕉游5孜铮仕崾羌也媳皮酪氨酸酶型酚氧化酶的竞争性抑制剂;以为底物,柠檬酸是家蚕表皮漆酶型酚氧化酶的竞争性抑制剂。关键词:家蚕;表皮;酪氨酸酶;漆酶;分离纯化;性质作指导教师:许维岸和分别为·者:马晓春家蚕表皮酪氨酸酶型和漆酶型酚氧化酶分离纯化及其酶学性质研究
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英文缩略词’.—聚乙烯吡咯烷酮十二烷基硫酸钠最大速度缩略词家蚕表皮酪氨酸酶型和漆酶型酚氧化酶分离纯化及其酶学性质研究’
业学研究生签名:螂研究生签名:建旦堑盏日期:幽:￡塑苏州大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明学位论文使用授权声明本人郑重声明:所提交的学位论文是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。苏州大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、清华大学论文合作部、中国社科院文献信息情报中心有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外,允许论文被查阅和借阅,可以公布ǹ论文的全部或部分内容。论文的公布ǹ授权苏州大学学位办办理。导师签名:期日
引言得表皮变得坚硬和颜色变暗。在这一过程中,酚氧化酶催化完成的“醌鞣化’讨家蚕诜掷嗟匚簧狭ナ粲诶コ娓伲鄢崮浚隙昕疲也属。由于蚕茧是丝绸原料的主要来源,在人类经济生活及文化历史上有重要地位。因此长期以来有关家蚕的研究受到国内外广泛重视,把家蚕作为研究鳞翅目昆虫的模式种类。家蚕属于完全变态发育,从幼虫开始要经历多次蜕皮和形成新表皮一直到蛹和成虫。在发育过程中刚合成的新表皮柔软色淡,随后经过一系列硬化和黑化使的表皮或外骨骼的形成起到至关重要作用【俊昆虫表皮硬化是鞣化剂与表皮蛋白的氨基酸侧链之间发生共价交联反应引起的,与表皮蛋白结合的醌类物质可以再被还原成酚,暗示表皮和浅表皮之间的差异可能是由于形成的醌数量不同所致。,其中酚氧化酶是这一过程的关键酶,它能够催化单酚羟基