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酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测在儿童结核中的诊断价值
摘要本文旨在研究评价应用ELISPOT在儿童结核患者中的诊断价值,纳入一家三级甲等医院自2013年3月至2014年6月期间疑似肺结核的儿童,收集72名怀疑肺结核的儿童,结果40%确诊为肺结核和10%为非活动性结核,ELISPOT在儿童结核诊断的特异性敏,敏感性,阴性预测值,%,69%,%,%,酶联免疫斑点试验可辅助诊断儿童肺结核,阴性结果可排除肺结核,从而方便临床医师对疾病的诊断。
关键词: 酶联免疫斑点试验:儿童: 肺结核
中国分类号: 文献标志码 A
前言
研究表明,免疫力低下儿童感染肺结核几率是健康儿童的10-20倍,现在中国成为全球22个结核病高负担国家之一,儿童结核的预防和及早发现至关重要,由于儿童取痰标本比较困难,再者,传统的涂片法和分子诊断方法的特异性和灵敏度较低
[1],从而延误儿童肺结核的早发现,早治疗。目前,应用6KD早期分泌抗原靶点(ESAT-6)和10KD培养滤过蛋白(CFP-10)及肽段为抗原的T细胞干扰素(IFN-r)释放试验用来快速诊断儿童结核的感染,尤其对儿童肺结核诊断,排除假阴性及假阳性,本文旨在评价T-SPOT在痰标本中的诊断价值。
材料及方法
一设置与患者
本研究为北京一家拥有2000多张床位的儿童疾病医疗中心,在签署知情同意书之后,收集2013年3月至2014年6月期间所有怀疑肺结核的儿童,所有疑诊均有两周以上呼吸道感染,低热,乏力等症状,影像学表现肺结节和纤维化,伴或不伴有空洞。收集病人年龄、年龄、遗传史、治疗史和生活习惯以及随访信息,患者归为三组:培养出结核分枝杆菌,未经结核药物治疗为确诊结核组:抗结核治疗有效有活动结核症状为有效临床结核组:排除结核病的为排除结核组。
二实验室流程
标本图片依标流程处理,经金胺—罗丹明荧光染色检测抗酸杆菌。荧光染色阳性上午涂片经Kinyoun 染色法确证。然后进行结核分枝杆菌的培养。常规生化进行分枝杆菌的鉴定。来源于患者的组织模块采用福尔马林固定和石蜡包后进行HE染色进行组织病理学检测。
三 T-SPOT检测
ELISPOT技术是近20年发展起来的检测抗原特异性T细胞的技术,可以检测出1/100000~1/50000外周血单个核细胞中经某种抗原刺激后释放某种细胞因子的细胞,经过酶联显色后,通过ELlSPOT分析系统(ELISPOT Reader)对斑点进行计数,试验阴性定义为斑点数为零,阳性对照孔平均斑点数多为6个以上而且至少为空白背景对照斑点数的2倍。
四统计学分析
试验诊断的准确性以敏感度和特异度表示。各试验敏感度的比较采用卡方检验。采用
Kruskal Wallis 检验评估机体的免疫应答能力,,结果以P<。
结果
研究期间共纳入72例疑似结核的患者,患者临床特点见表(一),平均年龄3-12岁,63%为男性,72例结核患者中ELISPIT检验阳性为42例(%),见表(二),ELISPOT在儿童结核诊断的特异性敏,敏感性,阴性预测值,%,69%,%,%,发热为