利用农杆菌转化葡萄细胞生产有用次生代谢产物——白藜芦醇研究.pdf

西北大学
硕士学位论文
利用农杆菌转化葡萄细胞生产有用次生代谢产物——白藜芦醇
姓名:郭斌
申请学位级别:硕士
专业:植物学
指导教师:尉亚辉

摘要谂└司;糠郑笛榻峁砻鳎咸压び俗橹づ嘌天,关囊浚黄葡萄;农杆菌;邹悸ù转化:.。本实验以葡萄愈伤组织为材料,以根癌农杆菌晡8腥揪辏进行植物基因转化,经过筛选获得转化细胞系。用す舛訫行诱变,经过筛选获得突变细胞系。最后研究了不同的诱导子对白藜芦其间用疞的甘露醇处理∈保唤臼奔樱唤疚露;共培养时间小时;抑菌抗生素用疞头孢塞圬钠;以培养基为基本培养基,可使转化率提高到%左右。经过高压纸电泳实验证明能合成冠瘿碱,说明丫系狡咸严赴嘶蛏喜⒈泶铩6訫。进行测定,发现它生长迅速,生物量提高.%。,结果表明:对辐照分钟时,获突变细胞株:,对进在最后一部分,研究结果表明,不论是化学诱导子或是真菌诱导子都对疞诩恿苏饬街钟盏甲拥呐嘌希赴铣赊悸ù嫉牧刻岣叩对照的兑陨稀Mü杂盏技尤胧奔涞目疾欤峁砻鳎痹谙赴醇合成的影响。行测试,发现它的生长周期和生产周期比比照提前熳笥摇M卑邹悸白藜芦醇有促进作用。最佳的诱导子组合是:/疑咸焰的第天左右加入子/疑咸焰/诱导子时,可使白藜芦醇的产量在细胞胞本身生长不受影响的条件下增加%。、/一
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学位论文作者签名:害独创性声明签字日期:希谖哪暾荚日本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。酉盍堂
噗艘哇耻查塑型墅堕—————————一。溯——白藜芦醇利用农杆菌转化葡萄细胞生产有用次生代谢产物第一部分文献综述白藜芦醇的研究进展参镏邪邹悸ù嫉拇嬖纾夯⒄取⒙蚵樘佟⒙浠ㄉ⒊驶眑“、欧洲云杉⑽谒辙悸ù邢嗉谭⑾帧人们对其分子结构、化学性质等方面作了一定研究,尤其在发现它是葡萄酒中的一种重要营养成份后,对其药理作用进行了大量研究,现在白藜芦醇已经作为一种高效保健品尽管白藜芦醇分布比较广泛,但植物体内含量非常低,而在葡萄中含量相对较高”从葡萄果实、种子、到葡萄酒,都有学者对其中的白藜芦醇含量进行过研究。陈雷、韩雅珊【用法测定了葡萄果肉、叶柄、种子、叶片、果皮及果穗轴中自藜芦醇的含量,发现葡萄品种间各组织中的含量差异很大,葡萄果皮和果穗轴中的含量较高。发现它具有抗菌、抗脂质过氧化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝集、血管松弛、降血白藜芦醇是葡萄对微生物或其它异物感染或伤害作出反应的产物,秩竞螅嗬牖邓拦到辖颐挥惺艿角秩镜墓抵械陌邹悸ù己亢芨摺中,发现它们分别白藜芦醇,简称,化学名为芪三酚,’结构式为【:白藜芦醇是以葡萄属植物的一种抗逆物质首先被发现的,后来又在其他许多植物进入市场。.邹悸ù嫉难芯考壑白藜芦醇之所以受到如此的关注,主要归功于其广泛而有效的药理作用。人们已经脂和抗诱变等作用。咕饔具有较高韵抗菌性。取研究发现,在葡萄受到灰色葡萄孢,,—!冉ǜ叨冉档桶邹悸ù己俊⒅卸冉档桶邹悸ù己亢筒唤档桶邹悸ù己的三种甤接种到离体培养的沙地葡萄
。有高的、中等的和无效的病症。他们进一步研究发现,白藜芦醇含量的降低与培养滤液中虫漆酶的活性有关,在对种葡萄及其变种研究后,他们还发现葡萄的抗菌性与其中提取的白藜芦醇具有抗金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌和耻垢分枝杆菌的积累量则和接种量相关,随着接种量的加大,白藜芦醇的含量也随之增高。接种后,抗性葡萄株一瓹中白藜芦醇的含量是敏感性葡萄株一甊的叮并能在整个生长期间保持同样高的含量。溶于水中的/的白藜芦醇能抑制%的葡萄生单轴霉孢子的萌发。酸匝椋⑾职邹悸ù急榷』腔妆、槲皮、生育酚有更高的抗氧化槲皮素的。取啊倍訮奶崛∥镅芯糠⑾炙怯幸种浦使化物在小鼠肝中沉积的作用,能降低小鼠血清中天冬氨酸和丙氨酸的水平,还能抑制小鼠肝微粒体中由引起的脂质过氧化。白藜芦醇能抑制铜介导的低密度脂蛋白的氧化还能通过螯合作用和消除自由基来保护墓趸—密度脂蛋白难趸佣乐苟鲋嘌不牟等于年发现白藜醇的浓度为/所含白藜芦醇量密切相关。这一特征可以作为葡萄抗菌性的标记。“”等从哥伦比亚买麻藤的作用。.取啊把≡窳巳昀胩迮嘌剐云咸眩发现在接种葡萄生单轴霉后,葡萄对组织坏死的反应和白藜芦醇的积累相关。白藜芦醇寡趸饔白藜芦醇有很强的抗脂质过氧化作用。取粤虼捅仁能力。在小鼠肝的脂质体中,如果没有酶和参与,抑制%从ξ锏呐ǘ戎皇“”在赴嘌屑尤隖焙蛅一丁基氢过氧化物产