金针菇子实体化学成分的研究.doc

金针菇子实体化学成分的研究
对金针菇(Flammulina velutipes)子实体进行乙醇提取,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取,经柱层析分离得到12个化合物。经核磁共振及质谱鉴定,这12个化合物分别为:阿糖醇(1)、麦角甾醇(2)、顺式9二十三烯(3)、尿嘧啶(4)、烟酰胺(5)、黄嘌呤(6)、甘油(7)、腺苷(8)、海藻糖(9)、甘露醇(10)和酪氨酸(11),其中化合物3、5、6、7和11为首次从金针菇子实体中分离得到。
金针菇; 子实体; 分离纯化; 结构鉴定
金针菇(Flammulina velutipes)是著名的食药用菌[13],其子实体含有的多糖和蛋白等大分子代谢产物具有抗肿瘤、免疫调节、抗衰老、抗过敏、改善记忆障碍、抗氧化以及保肝护肝等多种生物活性[416]。近年来,随着对次级代谢产物研究的不断深入,从金针菇中分离得到了甾类、萜类、脂肪酸、醌类等多个小分子化合物,并且验证了金针菇中的甾醇类提取物和脂肪酸提取物具有体外抗肿瘤活性,醌类化合物和倍半萜类化合物具有抗菌活性[1721]。为进一步完善对金针菇子实体中次级代谢产物的研究,充分有效利用其价值,采用柱层析的方法,从金针菇子实体的醇提物中分离和纯化化合物,并对其结构进行分析鉴定。

1 材料与方法

金针菇(F. velutipes)子实体购自上海雪榕生物科技股份有限公司,晒干后得子实体干品。

正相薄层层析硅胶板(TLC,型号:HSGF254)为烟台江友硅胶开发有限公司产品;高效反相薄层层析硅胶板(型号:RP18F254S)为德国默克公司产品;柱层析硅胶(100~200目)购自国药集团化学试剂有限公司;Sephadex LH20凝胶为GE Healthcare集团产品;95%乙醇、无水乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮和甲醇均为分析纯,购自国药集团化学试剂有限公司;氘代试剂为美国Cambridge Isotope Laboratories产品。

将金针菇子实体干品(14 kg),用10倍95%乙醇(w/v)常温浸提3次,提取时间分别为48、24和24 h,将提取液合并减压浓缩,提取物中有结晶析出,重结晶获得化合物
1( g)。将剩余提取物用1 L蒸馏水复溶为混悬液,依次用等体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次, g, g, g, g, g。
取石油醚分部过硅胶柱层析(100~200 目,1300 g),石油醚∶乙酸乙酯(100∶0~50∶50)依次梯度洗脱,最后用甲醇洗脱,每份收集500 mL,共收集83个流份,根据TLC 检测结果合并相似的流份。其中46~49流份(石油醚∶乙酸乙酯=80∶20洗脱)中有结晶析出,重结晶后得到化合物2( g);将 53~82流份(石油醚∶乙酸乙酯=70∶30~50∶50洗脱, g)过硅胶柱(100~200目,200 g)层析,石油醚∶乙酸乙酯(98∶2~60∶40)依次梯度洗脱,其中65~74(石油醚∶乙酸乙酯=60∶40洗脱)流份有沉淀析出,得到化合物3( mg)。
氯仿分部经硅胶柱(100~200 目,400 g)层析,石油醚∶丙酮(100∶0~50∶50)依次梯度洗脱,最后用甲醇洗脱,每份收集300 mL,共收集78个流份,根据TLC 检测结果合并相似的流份。其中34~46流份(石油醚∶丙酮=90∶10洗脱)中有结晶析出,重结晶后得到化合物
2( mg)。
乙酸乙酯分部经硅胶柱(100~200目,500 g)层析,氯仿∶甲醇(100∶0~80∶20)梯度洗脱,每份收集300 mL,共收集60个流份,根据TLC 检测结果合并相似的流份。其中42~45(氯仿∶甲醇=90∶10~80∶20洗脱)流份中有沉淀析出,得到化合物4( mg)。
正丁醇分部经硅胶柱(100~200目,2400 g)层析,氯仿∶甲醇(100∶0~50∶50)梯度洗脱,再经氯仿∶甲醇∶水(5∶5∶,5∶5∶1)梯度洗脱,每份收集500 mL,共收集135个流份,根据TLC 检测结果合并相似的流份。79~96流份(氯仿∶甲醇=70∶30洗脱, g)经硅胶柱(100~200目,200 g)层析,氯仿∶甲醇(98∶2~80∶20)梯度洗脱,得到41~50(氯仿∶甲醇=94∶6洗脱)、84~88(氯仿∶甲醇=90∶10洗脱)两组分。其中41~50组分再经Sephadex LH20凝胶柱层析,甲醇洗脱,得到化合物5( mg)。84~88组分