论家蚕谷胱甘肽S转移酶BmGSTe4基因的克隆和真核表达.pdf

西南大学
硕士学位论文
家蚕谷胱甘肽-S-转移酶BmGSTe4基因的克隆和真核表达
姓名:刘佳
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:潘敏慧;鲁成
20090401
家蚕谷胱甘肽一��R泼窧���基因的克隆和真核表达摘要潘敏慧教授鲁成教授细胞生物学专业硕士研究生:刘佳指导教师:而��┒嗽蛴�个�韭菪�钩桑�幸桓霰J氐腟�催化位点。以神经网络启动子预测分析发现,大类群,分别是�������、���蚙��拇罄唷6�也螧���与昆虫特异的谷胱甘肽.��R泼���������.���是一个多功能的超家族酶类,广泛分布于动物、植物、酵母和细菌等生物体中。��在昆虫对有机磷、有机氯和拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性中起着重要的作用。农药在害虫防治中起着�常重要的作用,但随着大量农药的使用,昆虫抗药性日益加剧,迫使人们不断开发新的农药产品或增加农药的用量,这不但制约了经济的发展,也给环境带来了严重的负担,影响到了经济和人类的可持续性发展。世界上�%以上的农林害虫属于鳞翅目,家蚕作为鳞翅目昆虫的模式生物和重要的经济昆虫,是目前唯一完成了基因组测序的鳞翅目昆虫。对家蚕���蚪�醒芯浚�唤瞿芪<�蚕抗性品系的育成提供理论依据,也可为开展鳞翅目昆虫的生物防治奠定基础。本文采用生物信息学分析方法,依据家蚕基因组数据库和���菘庑畔ⅲ������捎肦�甈�方法分析了其组织表达特性并进行了序列分析。利用基因工程技术,克隆谷胱甘肽.��R泼负螅�ü�俗床《颈泶镌靥逑低彻菇�薆���基因的真核表达载体,对�����蚪�辛苏婧吮泶铮�⒍员泶锊�锝�辛藈�����验证和酶活性测定,获得结果如下:�瓸���基冈的克隆和序列分析克隆了家蚕的�����颍�没�虻耐暾�嗦肭�蛄谐ざ任���,由�鐾庀宰佑��瞿诤�幼槌桑�诤�幼艹ざ任��,最长内含子为��,最短内含子为���������┒�郑���畃.��竟�个结构基序组成,�����个��盒,在上游��区域内搜寻相关调控元件时,共发现了�个可能的转录调控元件,分别是:���、���、���和����。系统发生树明显分为四����易寰畚R弧�唷��������珿��珽���捅琵�。
关键词:家蚕谷胱甘肽.��R泼父俗床《颈泶锵低痴婧吮泶��瓸���基因的表达模式分析检测发现�����灾辉诒砥ず屯凡坑斜泶铮�谄溆�个组织中基本不表达,并且在表皮中表达量较头部表达量高。表明�����缘谋泶锞哂薪细叩淖橹�匾煨浴��瓸���基冈的真核表达运用�����转染试剂将重组病毒转染进入��赴�螅�璖�.��分析鉴定,比较蛋白条带,结果发现感染重组杆状病毒���.����南赴�恋碛幸辉嘉���左右的目的特异蛋白条带表达。��验证感染重组杆状病毒���.����南赴�恋砭璖�.��电泳完后切取��和����涞慕航�凶Dず蚖�������杂交。在样品检测到杂交信号。表明,目的基因已在细胞内表达。�瓽��富钚圆舛�以��作底物,对重组表达蛋白酶进行初步的酶活性测定,结果表明外源表达的��蛋白酶具有较好的生物学活性,为����鞍捉�徊降墓δ苎芯康於�嘶��两南人�踤����一论正�畐����
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