微生物检验(李鲁平).ppt

临床微生物学检验
沈阳市第六人民医院李鲁平
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临床标本的采集与处理
细菌形态学检查
细菌的分离培养与接种技术
细菌生化反应鉴定的理论基础
医院感染的实验诊断
抗菌药物敏感性试验
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一、微生物检查基本方法
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致病菌的检验程序
标本
直接涂片染色镜检
分离培养与鉴定
病原菌抗原检测
其它检测
形态、结构、染色性
涂片镜检
菌落特征
生化反应
药敏试验
血清学反应
沉淀反应
协同凝集
免疫荧光
对流免疫电泳
酶免疫测定
免疫印迹
细菌代谢产物(气相色谱)
细菌核酸
(PCR)
噬菌体分离
细菌素测定
分子生物学技术
动物试验
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一、微生物检查基本方法与诊断技术
(一)  细菌形态学检查法:
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①普通光学显微镜:
②  暗视野显微镜:
③  相差显微镜:
④  荧光显微镜:
⑤ 电子显微镜:
;
①单染色法:用一种染料将细菌和周围物体染成同一种染色。
②复染色法: 用两种或两种以上染料染色的方法
革兰染色;抗酸染色;
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(二)  细菌的人工培养及生化实验

①培养基: 根据用途分基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、特殊培养基。根据物理性状分液体培养基、固体培养基、半固体培养基。
② 细菌接种法:
③细菌培养法: 需氧培养; 厌氧培养; 二氧化碳培养; 微需氧培养。
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2 .细菌生物化学实验方法、种类及原理
① 糖分解产物实验
糖发酵试验; 葡萄糖代谢类型鉴别试验; 七叶苷水
解试验; 淀粉水解实验;甲基红试验; V-P试验;ONPG试验.
② 蛋白质分解产物试验
明胶液化试验; 吲哚试验;硫化氢试验; 尿素酶试验;
苯丙氨酸脱氨酶试验; 氨基酸脱羧酶试验.
③碳源利用试验
枸橼酸盐利用试验,丙二酸盐利用试验.
④呼吸酶类试验
氧化酶试验; 触酶试验; 硝酸盐还原试验.
⑤其他生化试验
脂酶试验; 磷酸酶试验; DNA试验; 凝固酶实验;胆汁溶菌试验
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细菌L型生长缓慢,营养要求高,对渗透压敏感,普通营养基上不能生长,培养时必须用高渗的含血清的培养基。
细菌L型在高渗的含血清的培养基上生长后形成三种类型的菌落。
(三) 细菌L型的概念及检查法
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二、微生物学检验概述
(一) 标本采集种类与原则
1) 血液:一般在病人发热初期或高峰期采集,怀疑细菌
性心内膜炎时,血培养不少于三次。一般为静
脉血,成人采血量10—20ml,婴儿和儿童1—2ml。
2) 尿液:最好用导尿管收集尿液,要防止逆行性感染。
3) 粪便:取脓血或粘液的粪便置清洁容器中送检。排便
困难者,可用直肠拭子采样。
4) 鼻咽拭子:
5)痰: 清晨第一口痰为宜,必须先用清水漱口,避免
唾液混入。
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6) 脑脊液及其他:CSF应无菌操作进行腰椎穿刺;胸水、腹水、包液、滑囊液等用注射器无菌操作采集。
7)眼,耳部标本: 用无菌拭子采集,及时接种相应培养基。
8) 性传播疾病标本:男性采取尿道脓性分泌物,女性采取宫颈分泌物,供镜检及培养; 梅毒取皮肤渗出物和淋巴穿刺液涂片;疱疹取疱内液体或刺破小疱后,用无菌拭子采样。
9) 创伤、组织、脓肿标本:根据不同部位采取不同标本。
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