西南政法大学司法鉴定中心 作业指导书.doc

西南政法大学司法鉴定中心
作业指导书
文件编号
FSC07—TD—M-2
页号

版次
第一版第1次修改
标题
STR 与性别位点基因型检测
审核人
王旭东
批准人
易旻
发布日期
2008年11月18日

通过对D3S1358等STR位点的基因型检测,进行亲子鉴定和个体识别。

本作业指导书适用于法医物证学实验室对刑事、民事以及非诉讼案件中人体血液(斑)、
羊水、带毛囊毛发、混合斑、精斑、组织等生物学检材的DNA基因型检验以及性别位点的检测。

中心主任批准具有法医物证鉴定资格的鉴定人履行此项工作。

本法所用试剂为分析纯,在有效期内使用;使用pH试纸测定溶液的pH值。
10mg/ml蛋白酶K:lmg蛋白酶K溶于100μl双蒸水中,每管30μl分装,冰箱冻存。
lmol/L DTT:称取0. 77g DTT,加入5ml双蒸水,溶解后加入50μl lmol/l NaAc(pH ),混匀。
Chelex 100 (50-100 mesh):5g Chelex 100加双蒸水至50ml,检查pH为9-11。
0. 5mol/L EDTA:于800ml双蒸水中加入186. 1g Na2EDTA - 2H2O,在磁力搅拌器上搅拌溶解(可加20g NaOH助溶,此时pH=)。检查pH,用水定容至1L。
Powerplex 16 System扩增试剂盒(Promega公司):冰箱冻存。
GeneScan-600 [ILS] ( Promega公司):2-6℃保存。
POP-4(ABI公司):2-6℃保存。

310 型遗传分析仪。
9700型PCR扩增仪。
振荡器。
台式高速离心机。
恒温干燥箱。
计算机。

从生物学检材中抽提DNA,针对D3S1358, TH01, D21S11, D18S51, Penta E,D5S818, Dl3S317, D7S820, Dl6S539, CSFIPO, Penta D,vWA, D8Sl l79, TPOX, FGA等STR位点和性别位点Amelogenin进行复合PCR扩增,将扩增产物进行电泳分析,确立基因型。

DNA提取
:
(1) ,然后加入3μl全血(约9mm2血斑),小心混匀;
西南政法大学司法鉴定中心
作业指导书
文件编号
FSC07—TD—M-2
页号

版次
第一版第1次修改
标题
STR 与性别位点基因型检测
审核人
王旭东
批准人
易旻
发布日期
2008年11月18日

室温保温30min,间歇振荡;
(2) 10000-15000 r/min离心2-3min;小心移去上清液。若样品为血斑,则保留载体;
(3) 沉淀中加入10% Chelex 100 (50-100mesh) 200μl; 56℃保温30min;
(4) 高速振荡5-10sec; 100℃ 8min;
(5) 高速振荡5-10sec; 10000-15000 r/min离心2-3min,取上清液用于PCR扩增;2-8℃保存或冻存剩余DNA。
:
(1) 用三蒸水清洗毛发;剪取毛根部分; Eppendorf管中;
(2) 加入200μl 10% Chelex 100(50-100 mesh)及2μl 10mg/ml PK(蛋白酶K) , 56℃保温6-8hr或过夜;
(3) 高速振荡5-10sec;沸水煮8min(注意毛发应浸没于Chelex液);
(4) 高速振荡5-10sec;10000-15000 r/min离心2-3min;取上清液用于扩增反应,2-8℃保存或冻存剩余DNA。
:
(1) 用牙签刮拭口腔粘膜,将其放入1. 5ml离心管内,加入200μl 10% Chelex (50-100 mesh);搅动,使细胞脱落;
(2) 56℃保温15-30min;
(3) 高速振荡5-10sec;100℃ 8min;
(4) 高速振荡5-10sec, 10000-15000 r/min离心2-3min;
(5) 取上清液用于扩增反应;2-8℃保存或冻存剩余DNA。
:
(1) 取9mm2唾