扫描电镜制样.doc

扫描电镜常规制样方法
方法一:植物叶片单固定扫描电镜制样方法
取材
将叶子切成5-10mm长方形6-10片。
固定
%戊二醛+2%多聚甲醛固定液中进行抽气(样品无气泡产生,全部沉于底部即可),固定12小时以上。

用乙醇逐级脱水30%→50%→70%→80%→90%乙醇,每20 分钟更换一次(70%以前放置4°C冰箱内), 100%乙醇每20分钟一次,共5次(70%乙醇以后放置室温脱水)。
替换
将乙醇倒掉,换叔丁醇,每20分钟一次,共5次。第5次浸过样品即可,放置冰箱冷冻层(-20°C左右)30分钟或过夜。
干燥
用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。
粘台
将上下表皮分别粘在具有双面胶带的样品台上。
镀膜
用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。
观察并拍照
利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。
注明:此方法适合植物根、茎样品
方法二:植物叶片单固定扫描电镜制样方法
.取材
将叶子切成5-10mm长方形6-10片。
2预固定
%戊二醛+2%多聚甲醛固定液中进行抽气(样品无气泡产生,全部沉于底部即可),固定12小时以上。
冲洗
,每40分钟一次。

用1%四氧化锇(OsO4)-3小时。

,每5分钟一次。

用乙醇逐级脱水30%→50%→70%→80%→90%乙醇,每20 分钟更换一次(70%以前放置4°C冰箱内), 100%乙醇每20分钟一次,共5次(70%乙醇以后放置室温脱水)。
替换
将乙醇倒掉,换叔丁醇,每20分钟一次,共5次。第5次浸过样品即可,放置冰箱冷冻层(-20°C左右)30分钟或过夜。
干燥
用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。

将上下表皮分别粘在具有双面胶带的样品台上。

用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。
11. 观察并拍照
利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。
注明:此方法也适合根、茎
注明:此方法适合植物根、茎样品
方法三:花粉扫描电镜直接观察制样方法
1. 将花粉直接粘在具有双面胶带的样品台上。
-1600离子溅射镀金膜约10nm。
3. 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。
注明:此方法适合植物花粉自身干燥,无分泌污染物。
方法四:花粉扫描电镜单固定制样方法
取材
。
固定
%戊二醛+2%多聚甲醛固定,固定12小时以上。
冲洗
,每40分钟一次。

用乙醇逐级脱水30%→50%→70%→80%→90%乙醇,每10 分钟更换一次(70%以前放置4°C冰箱内), 100%乙醇每10分钟一次,共5次(70%乙醇以后放置室温脱水)。
替换
将乙醇倒掉,换叔丁醇,每10分钟一次,共5次。第5次浸过样品即可,放置冰箱冷冻层(-20°C左右)30分钟或过夜