虎金颗粒剂提取工艺的研究.doc

虎金颗粒剂提取工艺的研究.doc虎金颗粒剂提取工艺的研究
:罗绮珊,黄兆胜,赵珍东,王宗伟,程怡,许晓峰
【关键词】虎金颗粒剂
摘要:【目的】探讨虎金颗粒剂的最佳提取工艺路线。【方法】采用正交设计,以总大黄素、总蒽醌含量为醇提工艺指标,考察乙醇浓度、溶媒用量、提取时间等因素的最佳工艺条件;以总多糖含量为水提工艺指标,考察浸泡时间、水的用量、提取时间等因素的最佳工艺条件。【结果】醇提最佳工艺为:245*!mL体积分数为70%乙醇提取2*!h,共2次;水提最佳工艺为:80*!mL水,不用浸泡,提取15*!h,共3次。【结论】该提取工艺合理的,可行,为选择虎金颗粒剂的提取条件提供了实验依据。
关键词:虎金颗粒/分离和提纯;工艺学,制药;研究设计
虎金颗粒由虎杖、郁金等组成,经多年的临床疗效观察及动物实验研究证明,本方具有良好的抗脂肪肝及抗肝纤维化作用[1-5]。本文通过正交试验设计,对其提取工艺进行了实验研究,确定影响提取工艺的显著性因素。已有的研究表明,虎杖中的蒽醌类、郁金中的姜黄素等有效成分在乙醇中有较高溶解度,故这几味药材均采用乙醇提取;灵芝多糖具水溶性,故灵芝单独水提。结果如下。
1仪器、药材与试剂
11仪器
德;德国DIONEXP680A高效液相色谱仪(HPLC);德国DIONEXASI-100自动进样器;德国DIONEXPDA-100二极管阵列检测器;美国AgilentE8453紫外可见分光光度计;艾科浦ARUS-4-35G-2型台式超纯化水机。
12药材与试剂
药材购于致信药业有限公司,经广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定;大黄素(emodin)(批号:0756-200211)、1,8二羟基蒽醌(批号:0829-9702)、无水葡萄糖(批号:0833-9501)均购于中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯,水为超纯水;其余试剂为分析纯。
2实验方法与结果
21醇提工艺考察方法
以大黄素及总蒽醌含量为指标,按L9(34)正交表进行实验,结果见表1。表1醇提工艺各因素及水平设计(略)
211总大黄素含量测定方法
2111色谱条件
色谱柱:ChromasilC18,5μm,46*!mm×250*!mm;流动相:甲醇-016*!mol/L磷酸溶液(85
∶15);柱温:25℃;流速:10*!mL/min。
2112标准曲线制备
0204*!g/L的大黄素对照品溶液按1、4、8、12、16*!μL注入高效液相仪中,以含量为横坐标,峰面积为纵坐标,求得回归方程为y=52954x-01452,r=10,大黄素在0204~326*!μg范围内与峰面积呈线性相关。
2113样品制备及测定
按表1设计提取的醇提液,定容至250*!mL,吸取25*!mL置于蒸发皿中,水浴蒸干;残渣用25*!mol/L硫酸25*!mL溶解后,按文献[6]方法处理,定容至50*!mL;吸取10*!mL氯仿液于蒸发皿中挥干溶剂,用甲醇定容至10*!mL,过滤后作为供试液;按8~15*!μL注入高效液相仪中,按外标二点法求得总大黄素含量。
212总蒽醌含量(TA)测定
2121最大吸收波长的确定
取适量标准品溶液、样品溶液及缺虎杖的阴性样品溶液,于400~800*!nm范围扫描,标准品溶液、样品溶液均在5