拟南芥液泡膜NaH反向运输器AtNHX1抗体制备以及转AtNHX1基因烟草耐盐性的探究.pdf

中国农业大学
硕士学位论文
拟南芥液泡膜Na<'+>/H<'+>反向运输器(AtNHX1)抗体制备以及
转AtNHX1基因烟草耐盐性的研究
姓名:党云琨
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:陈珈

缩写一览表英文缩写英文名称中文名称丙烯酰胺腺苷三磷酸�溴��纫�』引哚磷酸甲苯胺蓝亚甲基双丙烯酰胺碱基对牛血清白蛋白焦碳酸二乙脂脱氧核糖核酸二硫苏糖醇大肠杆菌溴化乙锭异丙基一�瓺一硫代半乳糖苷���狟���培养基信使核糖核酸氯化硝基四氮唑蓝纳克互补��乙二胺四乙酸毫升�盐光密度�琋’·������������狟’���������������������������������������������������������。������瓺������狟���
队�聚胸腺嘧啶脱氧核糖核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳����ぁ�·����·��������·������聚合酶链式反应核糖核酸每分钟转速反转录聚合酶链式反应十二烷基磺酸钠��郾��0纺�旱缬�三羟甲基氨基甲烷酶活单位微克微升�溴��纫�一吲哚�一�话肴�糖苷�������������������������������������琋,��琋’一四甲基乙二胺����琋,���������������������.����甈���������������������������������—�����
摘要基酸的长������唇ㄔ�吮泶镌靥錺�����雠融合蛋白下游添加�鲎榘�酸密码子和终止密码子以便纯化。将��猣Ⅳ�巫H氪蟪Ω司鶭������泶锶�、∥、∥,对于我国乃至世界农业的发展有重大意义。�。本研究根据已发表的拟南芥液泡膜���⒎聪蛟耸淦骰���������蛄�片段并与载体连接得到克隆载体�����。��测序表明该片段与发布序列一致并获得�棵转基因阳性苗。/将野生型和转基因型烟草苗从生根培养基分别转移到含��拟南芥液泡膜��疕’反向运输器����抗体制备以及转���基因烟草耐盐性的研究表现为叶片枯萎,发根极少。与此相反,�迸嘌��蠳��ǘ鹊褪�虻扔���甘、���参镆号菽��/�反向运输器利用液泡膜�����虷����产生的膜两侧质度梯度运入液泡内积累。利用这一机制,植物细胞不仅能够降低胞质内的��晕��包含���基因完整的开放阅读框。随后从���中选取一段编码较多亲水性氨了电化学梯度将液泡基质中的质子顺电化学梯度运出液泡,同时将胞质中的��媾�胞质正常的���龋��铱梢杂行Ю�么⒋嬗谝号葜械腘�作为渗调剂。许多盐生植物都能够利用这一途径达到耐盐的目的,而大多数淡土植物,尤其是经济作物并不存在这一机制。因此研究如何利用液泡膜��疘�聪蛟耸淦鞲脑炫┳魑锏哪脱涡宰矗������设计引物,��肦���姆椒ù幽饽辖���中扩增得到���的�����缀椭�看说鞍撞⒚庖咄米樱�竦玫目寡G逍Ъ�构建一个由����舳�涌刂艫���泶锏闹参锉泶镌靥錺������并由农杆菌介导转化烟草���。利用��蚐����咏环椒ḿ�ㄔ偕�仓辏����的培养基,在�℃,�小时光照培养,��时黑暗培养的条件下生长�芎蠓⑾郑�吧�椭仓暝诤�����的�培养基上生长即受到明显抑制,而在含��������的�培养基上几乎不能生长,合蛋白����肗���、�痩为��������������、�������』,、
、√发现仅转基因烟草有杂交信号,诌�������虻谋泶锬苊飨蕴岣哐滩莸哪脱文芰Α�转���基冈植株的生长几乎不受影响。/仅在含���这些结果预示着我们能够利用异源的液泡膜���环聪蛟耸淦骰�蚋脑熘参镉绕涫蔷���的培养基中受到轻微抑制,表现为株高较矮,但对根系生长无影响。用����庖哂〖5姆椒ń�徊椒治�经过盐胁迫处理的转基因型和野生型烟草叶片中液泡膜��疕�聪蛟耸涞鞍椎暮�浚�济作物的耐盐性。关键词:���,耐盐性,烟草,拟南芥,基因工程。√�,
鮝�������������.������.�����瑆���������甒���甒�������������������朋��������������������骾����������琀�������������������������������甌�������������,��������甅�������轪����廿�������,�����·���.�����������。���。�������瓾���,�������琫��������琩������甇�����������������瑆��������.�����.��������甌�����.��甤��
.���������������.�������.������,��,���������,������.����������,