2.γ-氨基丁酸(GABA)幻灯片.ppt

γ-氨基丁酸(GABA)的分布及测定方法
周青 2110805057
生物化工
导师:汪钊教授
目录
分布
γ-氨基丁酸(GABA)含量的测定方法
薄层色谱
纸电泳法
纸层析法
比色法
氨基酸分析仪测定
毛细管电泳-电化学检测
高效液相色谱法
归纳和总结
分布
在动物体内,GABA主要分布于神经组织中,在哺乳动物的脑组织内分布最为集中,其含量是单胺类含量的1000倍,而在外围器官中含量很少。在植物体内,GABA是细胞自由氨基酸库的重要组分,胞液中有几种构型,可形成类似脯氨酸的环状结构。~,超过许多蛋白质类氨基酸的含量。
表一富含GABA植物
物料
GABA含量
谷物类
糙米

胚芽
mg/100g
处理后米胚芽
350~400 mg/100g
发芽糙米(处理后)
mg/100g
米糠
mg/100g
米糠水提取液
mg/100ml
米糠水提取液酸水解液
mg/100ml
根茎叶类
桑叶
mg/100g
茶鲜叶(CO2气体嫌气处理5h)
mg/100g
乌龙茶(先萎凋,后嫌气处理)
mg/100g
红茶(先萎凋,后嫌气处理)
mg/100g
贵州苦丁茶
mg/100g
鲜蕨
mg/100g
天花粉原料
栝楼根
%
川贵栝楼根
%
王瓜根
%
长猫瓜根
%
菠菜
414 nmol/g
土豆
166 nmol/g
红薯
137 nmol/g
山药
129 nmol/g
羽衣甘蓝
122 nmol/g
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测定方法
薄层色谱
纸电泳法
纸层析法
比色法
氨基酸分析仪测定
毛细管电泳-电化学检测
高效液相色谱法
原理
用一定波长的光照射在经薄层层析后的层析板上,对具有吸收或能产生荧光的层析斑点进行扫描,用反射法或透射法测定吸收的强度,以检测其浓度。
带电的γ-氨基丁酸于纸上在外电场作用下定向移动,从而达到分离目的。
用一定的溶剂系统展开,利用不同物质在固定相中的分配系数不同,而使混合样品达到分离的层析方法。
利用苯酚和次氯酸钠与游离氨反应显色。
利用各种氨基酸的两性离子特性、极性和分子大小等性质的不同,使用阳离子交换树脂进行色谱分析,采用不同pH和离子强度的缓冲溶液依次进行洗脱。
GABA与邻苯二甲醛反应,生成稳定具有电化学活性的衍生物。
γ-氨基丁酸与一些化学物质衍生反应,生成稳定的荧光物质。
纸电泳法
方法:取上清液用于点样于滤纸上,以标准GABA溶液做对照,在电压300V、室温条件下电泳60min,电泳缓冲液为吡啶-冰醋酸混合溶液[吡啶:冰醋酸:蒸馏水(体积比)=2:2:121,]。电泳完毕后取出电泳纸,水平摆放,室温下自然晾干,再在80℃电烘箱中风干。用喷雾法向电泳纸上均匀喷洒显色剂,于电热恒温干燥箱中90℃烘10 min,即显出在有氨基酸区域呈紫红斑点的层析图谱。将与GABA标准品位置一致的斑点剪下,加4ml洗脱液[洗脱液V(%硫酸铜溶液):V(75%乙醇溶液)=1:19]洗脱90min,在520nm波长处比色测定洗脱液的吸光度。
纸层析法
方法:展开剂V(正丁醇):V(醋酸):V(水)=4:1:3,茚三酮溶解于展开剂中,,在展开过程中,茚三酮随着展开剂沿滤纸向上移动。点样后的滤纸条在展开剂中展开、风干显色,将与标准品位置一致的斑点剪下,用洗脱液[V(1 g/L硫酸铜):V(体积分数75%乙醇)=2:38]洗脱,520nm处比色测定。
比色法
方法:先做GABA标准曲线:,(pH ) mL,摇匀,加5%苯酚溶液2mL,摇匀,加质量分数6%次氯酸钠溶液1mL,摇匀,放人沸水浴加热5min,立即置冰浴中5min,待溶液出现蓝绿色后,%酒精,进行波谱扫描,在最大吸收峰处测定溶液的吸光度,以吸光度为纵坐标,GABA的含量为横坐标,绘制标准曲线。把处理的样品按以上方法测吸光度,求出样品中GABA的含量。
氨基酸分析仪测定
方法:以日立835—30型氨基酸分析仪为例,先按仪器说明配制缓冲溶液及茚三酮溶液,,测得峰面积,绘制标准曲线。把处理的样品按以上方法峰面积,求出样品中GABA的含量。