该【草鱼cDNA文库的构建及CC趋化因子基因的特征分析 】是由【niuwk】上传分享，文档一共【4】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【草鱼cDNA文库的构建及CC趋化因子基因的特征分析 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。趋化因子基因的特征分析摘要:CC趋化因子是一类重要的细胞因子,能够促进免疫细胞的趋化、激活和增殖,参与人体免疫反应。本研究基于草鱼血细胞制备cDNA文库,趋化因子基因,进行其特征分析。结果显示,我们构建了一份高质量的草鱼cDNA文库,其中包含众多免疫相关基因。趋化因子基因片段,趋化因子。对这些基因的序列特征进行系统分析,趋化因子家族的经典特征,包括积累保守的半胱氨酸残基、跨膜结构域等。此外,这些基因的表达受到病原菌的免疫刺激和特定组织的调控。趋化因子的发现提供了新的思路和方法。关键词:草鱼;趋化因子;特征分析引言:CC趋化因子(chemokines)是一类小分子细胞因子,分子量在8-14kDa之间,序列,可以通过与G蛋白偶联的特异性GPCR介导细胞的趋化、激活和增殖等生物学作用。近年来,趋化因子也引起了广泛关注,并被认为是调控机体炎症反应、免疫细胞迁移及其相互作用的重要分子。据报道,在草鱼(Ctenopharyngodonidellus)趋化因子基因,但它们的生物学功能和特征尚未完全阐明。因此,在本研究中,我们旨在构建草鱼cDNA文库,趋化因子基因,并进行其特征分析,以期为深入研究草鱼免疫调控机制提供更多的线索和思路。材料与方法:-15cm,体质量50-100g的健康草鱼20尾。,取新鲜血液,使用红细胞裂解缓冲液裂解红细胞,将白细胞悬液收集,使用Trizol试剂进行血细胞总RNA提取。,并进行双链线性化。之后,使用SMARTcDNALibraryConstructionKit将cDNA文库构建到pDNR-LIB质粒载体上,并用EBL脉冲协议进行电转化。,用PCR扩增文库中的少数代表性基因,判断文库的质量和完整性。,趋化因子基因的PCR扩增,并利用TA克隆技术将得到的PCR产物亚克隆至pMD18-T载体,最后进行测序和序列鉴定。、物种起源分析、结构分析,确定其物种来源及功能含义。结果:,通过PCR扩增表征,该文库大小达2×10^6个克隆,,保证了其覆盖性和多样性。趋化因子基因筛选趋化因子基因片段。经T-A克隆处理和测序,趋化因子(CiCXCL10b,L18和CiCXCL15)。,它们分别长达456、519和669个bp,编码149、179和196个氨基酸残基,趋化因子家族特征,如包含四个Cys残基和保守区域等。NT序列比对结果表明,趋化因子序列具有高度保守性,并与人类和小鼠中的相应序列有一定的同源性。,趋化因子在不同组织和日龄草鱼中呈组织和时序特异性表达。免疫刺激试验发现,病原菌刺激能显著促进其表达。讨论与结论:在本研究中,我们成功地构建了一份高质量、多样性和覆盖性的草鱼cDNA文库,趋化因子基因,并对这些基因进行了特征分析。分析结果表明,趋化因子家族特征,目前已知在草鱼中具有重要的免疫调控作用。趋化因子的发现提供了新的思路和方法。参考文献:,&shellfishimmunology,2007,23(2):438-,,2014,2014:,,hemokinereceptorsingrasscarp(Ctenopharyngodonidella).,Biochemistry&molecularbiology,2015,181:1-9.
草鱼cDNA文库的构建及CC趋化因子基因的特征分析 来自淘豆网m.daumloan.com转载请标明出处.
