HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒的制备及免疫效应分析.docx

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摘要
HPV16是宫颈癌最常见类型的高致癌性人乳头瘤病毒之一。本研究基于HPV16基因组DNA，构建了一个新型的HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白，通过表达、纯化和重组技术，制备了HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒（VLPs）。免疫效应分析表明，该VLPs具有较好的免疫原性和免疫保护作用，在小鼠体内具有产生高水平抗体反应和细胞免疫反应的能力。本研究为HPV16疫苗的开发提供了新思路和研究基础。
关键词：人乳头瘤病毒16型；多表位嵌合蛋白；病毒样颗粒；免疫效应
Introduction
宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，人类乳头瘤病毒（HPV）是宫颈癌的主要致病因素之一。目前已知的HPV病毒类型超过150种，其中高致癌性HPV16和HPV18是最常见的类型，占所有宫颈癌病例的70%以上（1）。基于HPV L1病毒样颗粒（VLPs）的技术，已经开发出了多价HPV疫苗，可以预防HPV感染和相关的宫颈癌和其他相关癌症，具有广泛的应用前景。但是，由于HPV病毒具有较大的基因组，开发多价疫苗需要涉及多种不同的L1VLPs的提取和组合，疫苗生产成本较高。
因此，研究人员开始探索利用多表位嵌合蛋白技术，将不同种类的HPV L1蛋白和其他HPV相关蛋白结合，制备出具有多价抗原性的新型HPV疫苗。UL138是HPV16基因组中的一个非结构蛋白，与病毒的免疫逃避和肿瘤形成有关（2）。本研究通过将HPV16L1蛋白与UL138蛋白分别于C端和N端连接，构建了一个新型的HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白。通过重组技术，制备了HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒，并对其免疫效应进行了分析。
Materials and Methods
-UL138多表位嵌合蛋白基因
利用PCR扩增技术，从HPV16 DNA中克隆得到L1和UL138基因，将L1和UL138基因的C端和N端均带有适当限制酶切位点的序列，进行相应的限制性酶切和连接，构建出了HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白基因。
-UL138多表位嵌合蛋白表达载体
将HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白基因与pGEX-6p-1表达载体进行克隆，并PCR鉴定确认其正确性。
-UL138多表位嵌合蛋白
将重组表达质粒转化入大肠杆菌进行表达，并通过GST柱分离和纯化重组蛋白。
-UL138多表位嵌合病毒样颗粒
将纯化的重组HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白进行超滤和离心，制备得到VLPs。

将制备好的HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒分别注射入小鼠体内，采集血清和脾细胞，对其免疫效应进行分析。
Results
-UL138多表位嵌合蛋白基因
通过PCR扩增技术，成功将HPV16L1和UL138基因连接起来，构建了新型的HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白基因，基因测序证实了其正确性。
-UL138多表位嵌合蛋白表达载体
将HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白基因与pGEX-6p-1表达载体进行连接并PCR鉴定，证实其正确性。
-UL138多表位嵌合蛋白
将重组表达质粒转化入大肠杆菌进行表达，得到表达的重组HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白，通过GST柱分离和纯化重组蛋白，纯度达到90%以上。
-UL138多表位嵌合病毒样颗粒
将重组的HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白进行超滤和离心，制备得到VLPs，并通过电镜观察确认其形态正确。

将制备好的HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒注射到小鼠体内，采集血清和脾细胞，对其免疫效应进行分析。实验结果表明，小鼠体内产生了高水平的抗体反应，并且产生了T细胞免疫反应，说明HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒具有较好的免疫原性和免疫保护作用。
Conclusion
本研究成功构建了一个新型的HPV16L1-UL138多表位嵌合蛋白基因，通过重组技术，成功制备了HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒。免疫效应实验表明，该病毒样颗粒具有较好的免疫原性和免疫保护作用。该成果有望为开发新型的多价HPV疫苗提供新思路和研究基础。