食品公司玉米淀粉菌落总数的测定作业指导书.pdf

该【食品公司玉米淀粉菌落总数的测定作业指导书 】是由【老狐狸】上传分享，文档一共【7】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【食品公司玉米淀粉菌落总数的测定作业指导书 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。 : .

食品公司玉米淀粉菌落总数的测定作业指导书

执行标准：—2010 食品安全国家标准 食品微生物
学检验菌落总数测定
1 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如
下：
恒温培养箱（36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃）、冰箱（2 ℃～
5 ℃）、恒温水浴箱（46 ±1 ℃）、天平（感量为 g）、
均质器、振荡器、无菌吸管 [1 mL（具 mL 刻度）、10 mL
（具 mL 刻度）或微量移液器及吸头 ]、无菌锥形瓶（容
量 250 mL、500 mL）、无菌培养皿（直径 90 mm）、pH 计或
pH 比色管或精密 pH试纸、放大镜或/和菌落计数器
2 培养基和试剂
平板计数琼脂培养基：见附录 A 中 。
磷酸盐缓冲液：见附录 A 中 。
无菌生理盐水：见附录 A 中 。
3 检验程序
菌落总数的检验程序见图1。

图 1 菌落总数的检验程序
4 操作步骤
样品的稀释
固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL
- 1 - : .

磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～
10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀
释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min ～2 min ，
制成 1:10 的样品匀液。
液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225
mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当
数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。
用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀
液 1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（注
意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1
支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀
液。
按 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀
液。每递增稀释一次，换用 1 次 1 mL 无菌吸管或吸头。
根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～3 个适宜
稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行 10 倍
递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释
度做两个平皿。同时，分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个
无菌平皿内作空白对照。
及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼
脂培养基（可放置于 46 ±1 ℃℃恒温水浴箱中保温）倾注
平皿，并转动平皿使其混合均匀。
培养
待琼脂凝固后，将平板翻转， 36 ±1 ℃℃培养48 h
- 2 - : .

±2 h。水产品 30 ±1 ℃℃培养 72 h±3 h。
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的
菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约
4 mL），凝固后翻转平板，按 条件进行培养。
菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍
数 和 相 应 的 菌 落 数 量 。 菌 落 计 数 以 菌 落 形 成 单 位
（colony-forming units，CFU）表示。
选取菌落数在 30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落
生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌
落数，大于 300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌
落数应采用两个平板的平均数。
其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，
而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片
状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，
即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则
将每条单链作为一个菌落计数。
5 结果与报告
菌落总数的计算方法
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围
内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀
释倍数，作为每 g（mL）样品中菌落总数结果。
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内
- 3 - : .

时，按公式（1）计算：

式中：
N——样品中菌落数；
∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）。

若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300 CFU，则
对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可
计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU ，则应按
稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落
生长，则以小于 1乘以最低稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU
之间，其中一部分小于30 CFU 或大于 300 CFU 时，则以最
接近 30 CFU或 300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
菌落总数的报告
菌落数小于 100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，
以整数报告。
菌落数大于或等于 100 CFU 时，第 3 位数字采用“四
舍五入”原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代替位数；
- 4 - : .

也可用 10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，
采用两位有效数字。
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落
蔓延。
若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
称 重 取 样 以 CFU/g 为 单 位 报 告 ， 体 积 取 样 以
CFU/mL 为单位报告。
附录 A
（规范性附录）
培养基和试剂
平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基
成分
胰蛋白胨 g
酵母浸膏 g
葡萄糖 g
琼 脂 g
蒸馏水 1000 mL
pH ±
制法
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节 pH。分装试
管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。
磷酸盐缓冲液
成分
磷酸二氢钾（KH2PO4） g
- 5 - : .

蒸馏水 500 mL
pH
制法
贮存液：称取 g 的磷酸二氢钾溶于 500 mL 蒸馏水
中，用大约 175 mL 的 1 mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH，用蒸
馏水稀释至 1 000 mL后贮存于冰箱。
稀释液： mL ，用蒸馏水稀释至 1 000 mL，
分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌15 min。
磷酸盐缓冲液
成分
磷酸二氢钾（KH2PO4） g
蒸馏水 500 mL
pH
制法
贮存液：称取 g 的磷酸二氢钾溶于 500 mL 蒸馏水
中，用大约 175 mL 的 1 mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH，用蒸
馏水稀释至 1 000 mL后贮存于冰箱。
稀释液： mL ，用蒸馏水稀释至 1 000 mL，
分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌15 min。
无菌生理盐水
成分
氯化钠 g
蒸馏水 1 000 mL
制法
- 6 - : .

称取 1 000 mL 蒸馏水中，121 ℃高压
灭菌 15 min。