丙二醛MDA的测定方法.ppt

该【丙二醛MDA的测定方法 】是由【fanluqian】上传分享，文档一共【10】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【丙二醛MDA的测定方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
CLICK HERE TO ADD A TITLE
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物之一。植物在逆境下遭受伤害与活性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
演讲人姓名
植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
1
原理
2
硫代巴比妥酸
3
丙二醛
4
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮
（三甲川）
5
仪器设备
分光光度计；
01
研钵；
02
剪刀；
03
恒温水浴；
04
试管：20 mL×4
05
离心机。
06
试剂
5 %三氯醋酸；
%硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）；
mol · L–1磷酸缓冲液，
pH 。
材料
正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米或其他植物的叶片。
g，放入冰浴的研钵中，加入少许石英砂和2 mL mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。将匀浆转移到试管中，再用3 mL mol · L-1磷酸缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。
将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放入冷水浴中。
取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干， cm长的小段，混匀。
在提取液中加入5 mL %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。
待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清液并量其体积。 %硫代巴比妥酸溶液为空白测532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
方法与步骤
计算结果
1
式中，Vt：提取液总体积（mL）；
Vs：测定用提取液体积（ml）；
FW：样品鲜重（g）。
2
可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。
低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（ nmol · L-1）
如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。
注意事项
思考题
不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化不同，说明了什么？